| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-46页 |
| ·生物催化芳香硝基还原研究进展 | 第15-27页 |
| ·芳香硝基化合物的分布与危害 | 第15-17页 |
| ·芳香硝基化合物的还原机理 | 第17-19页 |
| ·生物体催化芳香硝基的还原 | 第19-24页 |
| ·酶催化芳香硝基的还原 | 第24-26页 |
| ·生物催化芳香硝基还原研究的趋势 | 第26-27页 |
| ·芳香硝基还原酶 | 第27-40页 |
| ·硝基还原酶的分类及特点 | 第27-29页 |
| ·硝基还原酶的结构及催化机制 | 第29-37页 |
| ·硝基还原酶的生物学功能 | 第37-40页 |
| ·芳香硝基还原菌株的筛选及硝基还原酶的获取方法 | 第40-44页 |
| ·芳香硝基还原菌株的筛选 | 第40页 |
| ·硝基还原酶的获得 | 第40-44页 |
| ·本论文的研究意义及内容 | 第44-46页 |
| 2 高效还原芳香硝基链霉菌的筛选及鉴定 | 第46-64页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料与仪器 | 第46-47页 |
| ·供试菌株 | 第46-47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·实验试剂 | 第47页 |
| ·菌株筛选策略 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-55页 |
| ·硝基还原分析方法的确定 | 第48-50页 |
| ·供试培养基配方 | 第50-51页 |
| ·菌体培养与收集 | 第51页 |
| ·菌体全细胞转化底物4-硝基-1,8-萘酐 | 第51页 |
| ·菌株的形态及培养特性观察 | 第51-52页 |
| ·菌株的生理生化特性鉴定 | 第52-53页 |
| ·菌株的16S rDNA序列测定与分析 | 第53-55页 |
| ·实验结果 | 第55-62页 |
| ·菌株的初筛及复筛 | 第55页 |
| ·菌株的形态学观察 | 第55-56页 |
| ·菌株的培养特性观察 | 第56-57页 |
| ·菌株的生理生化特性 | 第57页 |
| ·菌株的碳源利用情况 | 第57-58页 |
| ·菌株的全细胞糖型和氨基酸分析 | 第58-59页 |
| ·菌株16S rDNA的分子生物学分类鉴定 | 第59-61页 |
| ·链霉菌及其它生物催化剂还原芳香硝基效率的比较 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 3 链霉菌高效还原芳香硝基的特性 | 第64-78页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·实验材料与仪器 | 第64-65页 |
| ·供试菌株 | 第64-65页 |
| ·实验仪器 | 第65页 |
| ·实验试剂 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·菌株初始培养温度和pH值的确定 | 第65-66页 |
| ·碳源和氮源对链霉菌芳香硝基还原活性的影响 | 第66页 |
| ·链霉菌还原芳香硝基的时间和浓度依赖性 | 第66页 |
| ·助溶剂对链霉菌还原芳香硝基化合物的影响 | 第66页 |
| ·链霉菌全细胞的海藻酸钙包埋 | 第66-67页 |
| ·氧化还原介体辅助链霉菌还原芳香硝基化合物 | 第67页 |
| ·链霉菌转化底物能力的驯化 | 第67页 |
| ·链霉菌转化底物谱 | 第67-68页 |
| ·实验结果 | 第68-75页 |
| ·链霉菌初始培养温度和pH对转化率的影响 | 第68页 |
| ·碳源和氮源对链霉菌还原芳香硝基化合物的影响 | 第68-70页 |
| ·链霉菌还原芳香硝基的反应时间和底物浓度依赖性 | 第70页 |
| ·助溶剂对链霉菌还原芳香硝基化合物的影响 | 第70-72页 |
| ·菌株细胞的海藻酸钙包埋 | 第72页 |
| ·氧化还原介体AQDS对链霉菌还原芳香硝基的辅助作用 | 第72-73页 |
| ·链霉菌转化底物能力的驯化 | 第73-74页 |
| ·链霉菌转化底物谱 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 4 链霉菌硝基还原酶的分离纯化及性质表征 | 第78-104页 |
| ·引言 | 第78-79页 |
| ·材料与仪器 | 第79页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·实验仪器 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-86页 |
| ·菌体培养和细胞收集 | 第79页 |
| ·粗酶液的获得 | 第79-80页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第80-81页 |
| ·硝基还原酶的检测方法 | 第81页 |
| ·硝基还原酶分离纯化方法 | 第81-83页 |
| ·纯化的硝基还原酶的SDS-PAGE电泳 | 第83-84页 |
| ·纯化的硝基还原酶蛋白的N端测序 | 第84-85页 |
| ·纯化的硝基还原酶蛋白的质谱鉴定 | 第85页 |
| ·纯化的硝基还原酶的最适反应温度和pH值 | 第85-86页 |
| ·纯化的硝基还原酶的动力学测定 | 第86页 |
| ·影响硝基还原酶活性的因素考察 | 第86页 |
| ·实验结果 | 第86-101页 |
| ·硫酸铵沉淀蛋白 | 第86-87页 |
| ·Sepharose G-25层析脱盐 | 第87-88页 |
| ·Sepharose Q阴离子交换层析 | 第88-89页 |
| ·Superdex 200凝胶过滤层析 | 第89-90页 |
| ·硝基还原酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳行为 | 第90-91页 |
| ·分离的硝基还原酶N端序列比对分析 | 第91-92页 |
| ·链霉菌硝基还原酶的质谱分析 | 第92-93页 |
| ·温度对硝基还原酶活性的影响 | 第93-94页 |
| ·pH值对硝基还原酶活性的影响 | 第94页 |
| ·硝基还原酶的动力学表征 | 第94-97页 |
| ·特异性抑制剂对硝基还原酶活性的影响 | 第97-99页 |
| ·影响硝基还原酶活性因素的考察 | 第99-101页 |
| ·讨论 | 第101-102页 |
| ·硝基还原酶的分离纯化与鉴定 | 第101页 |
| ·分离的链霉菌硝基还原酶与其它硝基还原酶的比较 | 第101-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 5 链霉菌硝基还原酶的克隆表达及性质 | 第104-129页 |
| ·引言 | 第104-105页 |
| ·实验材料与仪器 | 第105页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第105页 |
| ·实验仪器 | 第105页 |
| ·实验试剂 | 第105页 |
| ·实验方法 | 第105-115页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第105-106页 |
| ·硝基还原酶基因的调取 | 第106-107页 |
| ·硝基还原酶基因的测序 | 第107页 |
| ·硝基还原酶基因及氨基酸序列分析及三级结构模拟 | 第107-108页 |
| ·硝基还原酶基因表达载体的构建 | 第108-110页 |
| ·硝基还原酶基因的无细胞系表达及活性检测 | 第110页 |
| ·硝基还原酶基因转化大肠杆菌BL21(DE3)-pLysS | 第110-112页 |
| ·硝基还原酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)-pLysS中的表达 | 第112页 |
| ·重组硝基还原酶的活性检测 | 第112-113页 |
| ·重组硝基还原酶的分离纯化 | 第113页 |
| ·重组硝基还原酶的定量及SDS-PAGE分析 | 第113页 |
| ·重组硝基还原酶的Western Blotting检测 | 第113-114页 |
| ·重组硝基还原酶的native-PAGE活性染色 | 第114页 |
| ·重组硝基还原酶的最适温度和pH值 | 第114-115页 |
| ·金属离子及化合物对酶活性的影响 | 第115页 |
| ·重组硝基还原酶的底物选择性 | 第115页 |
| ·实验结果 | 第115-127页 |
| ·链霉菌基因组DNA的提取 | 第115-116页 |
| ·硝基还原酶基因的调取 | 第116页 |
| ·硝基还原酶的基因和氨基酸序列分析 | 第116-119页 |
| ·硝基还原酶基因表达载体的构建 | 第119-120页 |
| ·硝基还原酶基因的无细胞系表达及活性检测 | 第120-122页 |
| ·硝基还原酶基因在大肠杆菌中的表达产物的鉴定 | 第122页 |
| ·重组硝基还原酶的分离纯化 | 第122-123页 |
| ·重组硝基还原酶的SDS-PAGE及活性染色检测 | 第123-124页 |
| ·重组硝基还原酶的最适温度和pH值 | 第124-125页 |
| ·金属离子及化合物对重组硝基还原酶的影响 | 第125-126页 |
| ·重组硝基还原酶底物谱 | 第126-127页 |
| ·讨论 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-129页 |
| 结论 | 第129-131页 |
| 展望 | 第131-132页 |
| 创新点摘要 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-141页 |
| 附录A 专有名词缩写 | 第141-143页 |
| 附录B 常用仪器一览表 | 第143-145页 |
| 附录C 常用试剂一览表 | 第145-147页 |
| 附录D 两株链霉菌16S rDNA序列 | 第147-149页 |
| 附录E 链霉菌硝基还原酶SNR的DNA和氨基酸序列 | 第149-150页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第150-151页 |
| 攻读博士学位期间专利申请情况 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 作者简介 | 第153-155页 |
