| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 选题依据 | 第11-13页 |
| 1.2 前期研究 | 第13-14页 |
| 1.3 研究内容与目的 | 第14-15页 |
| 1.4 文献综述 | 第15-24页 |
| 1.4.1 miRNA概述 | 第15-16页 |
| 1.4.2 miRNA对心脏发育的调控 | 第16-18页 |
| 1.4.3 miRNA在心脏疾病中的作用 | 第18-19页 |
| 1.4.4 线粒体中也存在 miRNAs | 第19-21页 |
| 1.4.5 线粒体内 miRNAs 的作用方式 | 第21页 |
| 1.4.6 miRNA对线粒体功能代谢的影响 | 第21-24页 |
| 2 实验材料及研究方法 | 第24-37页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第24页 |
| 2.2 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.3 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2.3.1 主要试剂及其来源 | 第25-26页 |
| 2.3.2 主要试剂配置方法 | 第26-27页 |
| 2.4 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.4.1 miRNA RT-PCR 引物设计 | 第27页 |
| 2.4.2 细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.4.3 组织总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.4.4 逆转录聚合酶链式反应 | 第28-29页 |
| 2.4.5 Real-time qPCR | 第29-30页 |
| 2.4.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.4.7 目的片段DNA的回收 | 第31页 |
| 2.4.8 感受态细胞的转化与单克隆菌的获得 | 第31-32页 |
| 2.4.9 菌落PCR | 第32页 |
| 2.4.10 重组载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.4.11 质粒提取 | 第34-36页 |
| 2.4.12 细胞转染 | 第36页 |
| 2.4.13 EGFP荧光测定 | 第36页 |
| 2.4.14 数据统计 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-48页 |
| 3.1 novel miRNA 的筛选 | 第37-38页 |
| 3.2 候选miRNA序列表达情况 | 第38-39页 |
| 3.3 RT-qPCR 扩增产物的测序 | 第39-42页 |
| 3.4 mitomiR-207 的定位 | 第42-43页 |
| 3.5 生物信息学预测 mitomiR 在线粒体基因组中的结合位点 | 第43-44页 |
| 3.6 连入pcDNA3-EGFP酶切载体的12个核苷酸序列测序结果 | 第44-47页 |
| 3.7 用 pcDNA3-U6M2 构建 mitomiR-207 重组载体 | 第47页 |
| 3.8 mitomiR-207上调线粒体基因 ND4 和 ND6 的表达 | 第47-48页 |
| 4 分析与讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 mitomiR 对线粒体基因组表达的调控方式 | 第48-50页 |
| 4.2 大规模测序和生物信息学结合在miRNA研究中的作用 | 第50-51页 |
| 4.3 mitomiR 可通过调节线粒体蛋白的表达影响影响复合体的活性 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52页 |
| 6 本文的创新之处 | 第52页 |
| 7 建议与不足 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附表1 | 第60-62页 |
