| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-29页 |
| ·β-丙氨酸简介 | 第14页 |
| ·丙酮酰基依赖型氨基酸脱羧酶 | 第14-19页 |
| ·L‐组氨酸脱羧酶 | 第15-17页 |
| ·Prv-HisDCase 结构 | 第16页 |
| ·Prv-HisDCase 酶学性质的研究 | 第16-17页 |
| ·精氨酸脱羧酶 | 第17-18页 |
| ·Prv-ArgDC 结构 | 第17页 |
| ·Prv-ArgDC 酶学性质的研究 | 第17-18页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶 | 第18-19页 |
| ·PanD结构 | 第18-19页 |
| ·PanD酶学性质的研究 | 第19页 |
| ·细胞固定化 | 第19-25页 |
| ·固定化材料应具备的条件 | 第20页 |
| ·常见固定化方法 | 第20-24页 |
| ·吸附法 | 第20页 |
| ·包埋法 | 第20-22页 |
| ·共价结合法 | 第22页 |
| ·交联法 | 第22页 |
| ·复合载体固定化 | 第22-23页 |
| ·无载体固定化 | 第23-24页 |
| ·固定化对微生物生理变化的影响 | 第24-25页 |
| ·固定化对微生物生长速率的影响 | 第24页 |
| ·固定化对微生物活性的影响 | 第24页 |
| ·固定化细胞对有毒抑制物质的耐受性 | 第24-25页 |
| ·选题背景和目的 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-29页 |
| 第二章 E. coli BL21 (DE3)/pET28c(+)-panD 工程菌株构建 | 第29-47页 |
| ·前言 | 第29页 |
| ·材料与方法 | 第29-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第29-30页 |
| ·仪器与 DNA 分析软件 | 第30页 |
| ·主要药品与试剂 | 第30-31页 |
| ·菌株构建相关药品试剂 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·活化培养基 | 第31页 |
| ·液体培养基 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-40页 |
| ·E. coli BL21(DE3)/pET28 c(+)-panD 菌株构建 | 第32-33页 |
| ·菌株构建实验流程 | 第32-33页 |
| ·pET28c(+)质粒的克隆 | 第33-34页 |
| ·E. coli DH5α感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·pET28c(+)质粒转化 | 第33-34页 |
| ·SDS 碱裂解法制备质粒pET28c(+)（中量制备） | 第34-35页 |
| ·SDS 碱裂解法制备质粒DNA | 第34页 |
| ·聚乙二醇沉淀法纯化质粒pET28c(+) | 第34-35页 |
| ·SDS 碱裂解法制备质粒pET28b-panD（小量制备） | 第35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·用PCR 技术扩增panD 基因 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第36页 |
| ·PCR 扩增产物的纯化 | 第36页 |
| ·PCR 产物和pET28c(+)质粒的双酶切 | 第36-37页 |
| ·酶切体系 | 第36-37页 |
| ·切胶回收 | 第37页 |
| ·连接与转化 | 第37-38页 |
| ·连接体系 | 第37-38页 |
| ·E. coli DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第38页 |
| ·质粒pET28 c(+)-panD 鉴定 | 第38-39页 |
| ·PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·碱基序列测定 | 第39页 |
| ·E. coli BL21(DE3)/ pET28 c(+)-panD 菌株构建及酶活力鉴定 | 第39-40页 |
| ·E. coli BL21(DE3)/ pET28 c(+)-panD 菌株构建 | 第39页 |
| ·酶活力测定 | 第39-40页 |
| ·重组菌株的 SDS-PAGE 检测 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-46页 |
| ·重组表达质粒pET28c(+)-panD 构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pET28 c(+)-panD 鉴定 | 第41-43页 |
| ·PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·碱基序列测定 | 第42-43页 |
| ·重组菌株 E. coli BL21(DE3)/ pET28 c(+)-panD 酶活力检测 | 第43-44页 |
| ·重组菌株的SDS-PAGE 检测 | 第44-46页 |
| ·实验小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 第三章 菌株培养条件的初步研究 | 第47-56页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·主要药品与试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-50页 |
| ·菌种斜面活化 | 第48页 |
| ·菌种接种子培养基 | 第48-49页 |
| ·摇瓶发酵条件的优化 | 第49-50页 |
| ·诱导时间对重组菌株产酶活力的影响 | 第49页 |
| ·不同乳糖浓度对重组菌株产酶活力的影响 | 第49页 |
| ·诱导温度对重组菌株产酶活力的影响 | 第49页 |
| ·不同菌龄对重组菌株产酶活力的影响 | 第49-50页 |
| ·诱导初始pH 值对重组菌株产酶活力的影响 | 第50页 |
| ·酶活定义 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-55页 |
| ·诱导时间对重组菌株产酶活力的影响 | 第50-51页 |
| ·不同乳糖浓度对重组菌株产酶活力的影响 | 第51-52页 |
| ·诱导温度对重组菌株产酶活力的影响 | 第52-53页 |
| ·不同菌龄对重组菌株产酶活力的影响 | 第53-54页 |
| ·诱导初始pH 值对重组菌株产酶活力的影响 | 第54-55页 |
| ·实验小结 | 第55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 第四章 PanD 的分离纯化及酶学性质研究 | 第56-76页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56-57页 |
| ·主要药品与试剂 | 第57-58页 |
| ·主要药品 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57-58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·活化培养基 | 第58页 |
| ·种子培养基 | 第58页 |
| ·发酵培养基 | 第58页 |
| ·PanD 酶活力测定 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-63页 |
| ·菌株培养 | 第59页 |
| ·菌种斜面活化 | 第59页 |
| ·菌种接种子培养基 | 第59页 |
| ·摇瓶发酵 | 第59页 |
| ·PanD的纯化 | 第59-61页 |
| ·菌悬液的制备 | 第59页 |
| ·超声波破碎条件的选择 | 第59-60页 |
| ·PanD的硫酸铵盐析 | 第60-61页 |
| ·脱盐 | 第61页 |
| ·Ni-亲和层析纯化 | 第61页 |
| ·脱盐 | 第61页 |
| ·PanD 酶学性质的研究 | 第61-63页 |
| ·酶的最适反应温度的选择 | 第61-62页 |
| ·酶的最适反应pH的选择 | 第62页 |
| ·酶的热稳定性 | 第62页 |
| ·酶的pH 耐受性 | 第62页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第62-63页 |
| ·温度对PanD自剪切的影响 | 第63页 |
| ·SDS-PAGE检测PanD | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-74页 |
| ·超声波破壁条件的研究 | 第63-65页 |
| ·硫酸铵饱和度的选择 | 第65-66页 |
| ·PanD的分离纯化 | 第66-68页 |
| ·硫酸铵分步盐析 | 第66页 |
| ·脱盐 | 第66页 |
| ·Ni-亲和层析 | 第66-67页 |
| ·PanD纯化 | 第67-68页 |
| ·PanD 学性质的研究 | 第68-72页 |
| ·酶的最适反应温度的选择 | 第68-69页 |
| ·酶的最适反应pH 的选择 | 第69-70页 |
| ·酶的热稳定性 | 第70页 |
| ·酶的pH 耐受性 | 第70-71页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第71-72页 |
| ·温度对PanD自剪切的影响 | 第72-74页 |
| ·实验小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-76页 |
| 第五章 E.coli BL21(DE3)/pET28b(+)-panD细胞固定化条件的研究 | 第76-92页 |
| ·前言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·菌株 | 第76-77页 |
| ·主要仪器设备 | 第77页 |
| ·主要药品与试剂 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77-78页 |
| ·活化培养基 | 第77页 |
| ·种子培养基 | 第77页 |
| ·发酵培养基 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78-82页 |
| ·菌株培养 | 第78页 |
| ·菌种斜面活化 | 第78页 |
| ·菌种接种子培养基 | 第78页 |
| ·摇瓶发酵 | 第78页 |
| ·菌体制备 | 第78页 |
| ·固定化细胞性能的评价 | 第78-79页 |
| ·固定化颗粒的机械强度考察 | 第78-79页 |
| ·固定化颗粒包埋效果的考察 | 第79页 |
| ·固定化颗粒粘附程度的考察 | 第79页 |
| ·固定化操作难易程度的考察 | 第79页 |
| ·细胞固定化 | 第79-81页 |
| ·PVA 包埋法 | 第79-80页 |
| ·海藻酸钠包埋法 | 第80-81页 |
| ·固定化细胞转化 | 第81页 |
| ·固定化细胞分批转化 | 第81页 |
| ·固定化细胞连续转化 | 第81页 |
| ·相关公式计算 | 第81-82页 |
| ·实验结果 | 第82-89页 |
| ·PVA 不同包埋法比较 | 第82-83页 |
| ·海藻酸钠包埋法 | 第83-88页 |
| ·不同成型剂的选择 | 第84-85页 |
| ·海藻酸钠浓度的选择 | 第85-86页 |
| ·菌体包埋量的选择 | 第86-87页 |
| ·不同天冬氨酸盐的选择 | 第87-88页 |
| ·固定化细胞连续转化 | 第88-89页 |
| ·实验小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 第六章 总结与展望 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 附录 1. 高效液相色谱检测β-丙氨酸 | 第95-97页 |
| 附录2：考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 | 第97-99页 |
| 附录 3 SDS-PAGE | 第99-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第102页 |
