| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 哮喘 | 第12-13页 |
| 1.1.1 哮喘的简介 | 第12页 |
| 1.1.2 哮喘的症状与发病原因 | 第12-13页 |
| 1.1.3 哮喘模型 | 第13页 |
| 1.2 转录组 | 第13-15页 |
| 1.2.1 基因组学 | 第13页 |
| 1.2.2 转录组学 | 第13-14页 |
| 1.2.3 RNA-Seq技术 | 第14-15页 |
| 1.3 气管平滑肌 | 第15-16页 |
| 1.3.1 气管平滑肌与哮喘的关系 | 第15页 |
| 1.3.2 气管平滑肌原代培养 | 第15-16页 |
| 1.4 KDM2A基因 | 第16-17页 |
| 1.4.1 KDM2A基因简介 | 第16页 |
| 1.4.2 KDM2A与增值的关系 | 第16-17页 |
| 1.5 本文构想 | 第17-19页 |
| 1.5.1 选题缘由 | 第17页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.5.3 研究结果 | 第18-19页 |
| 第2章 实验材料、仪器及试剂 | 第19-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第19页 |
| 2.2 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 实验所需试剂及耗材 | 第20-22页 |
| 2.3.1 试剂药品 | 第20-21页 |
| 2.3.2 溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.3.3 实验耗材 | 第22页 |
| 2.4 实验软件 | 第22-23页 |
| 第3章 RNA-seq哮喘气管平滑肌转录组分析 | 第23-37页 |
| 3.1 实验方法 | 第23-26页 |
| 3.1.1 哮喘模型的制备 | 第23页 |
| 3.1.2 气管平滑肌的分离 | 第23-24页 |
| 3.1.3 RNA-Seq实验方案 | 第24-26页 |
| 3.2 实验结果 | 第26-36页 |
| 3.2.1 样本RNA的质检 | 第26页 |
| 3.2.2 RNA-Seq测序数据 | 第26-27页 |
| 3.2.3 测序数据质量评估 | 第27-29页 |
| 3.2.4 污染检测 | 第29-30页 |
| 3.2.5 参考序列比对分析与QC分析 | 第30-32页 |
| 3.2.5.1 饱和度分析 | 第30-31页 |
| 3.2.5.2 测序随机性评估 | 第31页 |
| 3.2.5.3 reads在元件上的富集分析 | 第31-32页 |
| 3.2.6 差异表达转录本分析 | 第32-33页 |
| 3.2.7 GO富集分析 | 第33-34页 |
| 3.2.8 KEGG信号通路网络分析 | 第34-36页 |
| 3.3 小结 | 第36-37页 |
| 第4章 KDM2A基因在哮喘 气管平滑肌中的差异表达 | 第37-47页 |
| 4.1 实验方法 | 第37-41页 |
| 4.1.1 哮喘模型的制备与组织样的分离 | 第37页 |
| 4.1.2 肺组织切片、及免疫组化 | 第37页 |
| 4.1.3 Real-time PCR法检测气管平滑肌中KDM2A中mRNA的表达 | 第37-40页 |
| 4.1.3.1 总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 4.1.3.2 制备cDNA模板 | 第38-39页 |
| 4.1.3.3 普通PCR流程 | 第39页 |
| 4.1.3.4 普通PCR凝胶电泳： | 第39页 |
| 4.1.3.5 Real-time PCR流程 | 第39-40页 |
| 4.1.4 Western Blotting法检测气管平滑肌中KDM2A蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 4.1.4.1 蛋白质的提取 | 第40页 |
| 4.1.4.2 蛋白质浓度的测定 | 第40页 |
| 4.1.4.3 Western Blotting | 第40-41页 |
| 4.2 实验结果 | 第41-45页 |
| 4.2.1 肺组织病理切片分析 | 第41-42页 |
| 4.2.2 气管平滑肌中KDM2A mRNA及蛋白的表达 | 第42-45页 |
| 4.3 小结 | 第45-47页 |
| 第5章 小鼠气管平滑肌原代细胞的分离及培养与鉴定 | 第47-52页 |
| 5.1 实验方法 | 第47-48页 |
| 5.1.1 气管平滑肌的分离 | 第47页 |
| 5.1.2 原代细胞培养 | 第47页 |
| 5.1.3 细胞传代 | 第47-48页 |
| 5.1.4 细胞纯化 | 第48页 |
| 5.1.5 细胞免疫荧光 | 第48页 |
| 5.1.6 细胞增殖检测 | 第48页 |
| 5.2 实验结果 | 第48-50页 |
| 5.2.1 小鼠气管平滑肌原代细胞 | 第48-49页 |
| 5.2.2 细胞免疫荧光 | 第49页 |
| 5.2.3 小鼠气管平滑肌细胞增值曲线 | 第49-50页 |
| 5.3 小结 | 第50-52页 |
| 第6章 讨论与展望 | 第52-54页 |
| 6.1 哮喘气管平滑肌RNA-Seq分析结果 | 第52页 |
| 6.2 KDM2A在哮喘气管平滑肌中的表达 | 第52-53页 |
| 6.3 气管平滑肌细胞的原代培养 | 第53页 |
| 6.4 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第60页 |
