| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第1章 绪论 | 第17-44页 |
| 1.1 蝎毒素的研究概况 | 第17-29页 |
| 1.1.1 蝎的形态与种类 | 第17-18页 |
| 1.1.2 蝎毒液的组成及多样性 | 第18-19页 |
| 1.1.3 蝎毒素的研究现状 | 第19-27页 |
| 1.1.3.1 钠通道毒素 | 第20-21页 |
| 1.1.3.2 钾通道毒素 | 第21-23页 |
| 1.1.3.3 钙通道毒素 | 第23-24页 |
| 1.1.3.4 氯通道毒素 | 第24-25页 |
| 1.1.3.5 抗菌肽 | 第25页 |
| 1.1.3.6 毒液酶 | 第25-26页 |
| 1.1.3.7 其它组分 | 第26-27页 |
| 1.1.4 蝎毒素的研究意义 | 第27-29页 |
| 1.2 蝎及其毒素组学的研究进展 | 第29-35页 |
| 1.2.1 蝎毒液蛋白质组学研究进展 | 第30-34页 |
| 1.2.1.1 蛋白质组学技术方法概述 | 第30-31页 |
| 1.2.1.2 蝎毒液蛋白质组学的研究策略 | 第31-33页 |
| 1.2.1.3 蝎毒液蛋白质组学的研究现状 | 第33-34页 |
| 1.2.2 蝎毒腺转录组学研究进展 | 第34-35页 |
| 1.2.3 蝎基因组学研究进展 | 第35页 |
| 1.3 蝎脂解活性肽的研究进展 | 第35-38页 |
| 1.3.1 蝎脂解活性肽的结构与功能 | 第35-37页 |
| 1.3.2 马氏正钳蝎脂解活性肽的研究概况 | 第37-38页 |
| 1.4 蝎毒抗菌肽ABP-W1在治疗糖尿病足慢性溃疡中的应用 | 第38-42页 |
| 1.4.1 糖尿病足慢性溃疡的形成与治疗现状 | 第38-40页 |
| 1.4.2 蝎毒抗菌肽ABP-W1的生物活性与临床应用 | 第40-41页 |
| 1.4.3 糖尿病足慢性溃疡的蛋白质组学研究进展 | 第41-42页 |
| 1.5 本研究的出发点 | 第42-44页 |
| 第2章 马氏正钳蝎毒液蛋白质组学研究 | 第44-79页 |
| 2.1 前言 | 第44-46页 |
| 2.2 材料与方法 | 第46-52页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第46页 |
| 2.2.2 实验设备 | 第46-47页 |
| 2.2.3 粗毒样本制备与预分离 | 第47页 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离 | 第47-48页 |
| 2.2.5 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离 | 第48-49页 |
| 2.2.6 反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离 | 第49页 |
| 2.2.7 蛋白质酶解 | 第49-50页 |
| 2.2.8 LC/ESI-Q-TOF MS/MS分析 | 第50页 |
| 2.2.9 Mascot数据库搜索和蛋白鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.10 MALDI-TOF MS分析 | 第51-52页 |
| 2.3 实验结果 | 第52-76页 |
| 2.3.1 马氏正钳蝎毒液蛋白质组分的分离图谱 | 第52-54页 |
| 2.3.1.1 大于10 kDa的毒液蛋白质凝胶分离图谱 | 第53页 |
| 2.3.1.2 小于10 kDa的毒液蛋白质RP-HPLC分离图谱 | 第53-54页 |
| 2.3.2 马氏正钳蝎毒液蛋白质组分的质谱鉴定结果 | 第54-56页 |
| 2.3.3 质谱鉴定序列的注释、统计与功能分类 | 第56-62页 |
| 2.3.4 质谱鉴定的毒液蛋白 | 第62-74页 |
| 2.3.4.1 钠通道毒素 | 第62-65页 |
| 2.3.4.2 钾通道毒素 | 第65-68页 |
| 2.3.4.3 氯通道毒素 | 第68-69页 |
| 2.3.4.4 抗菌肽和防御素类似肽 | 第69页 |
| 2.3.4.5 酶抑制剂 | 第69-70页 |
| 2.3.4.6 其它典型毒素 | 第70页 |
| 2.3.4.7 非典型毒素 | 第70-71页 |
| 2.3.4.8 毒液酶 | 第71-72页 |
| 2.3.4.9 细胞相关蛋白 | 第72-74页 |
| 2.3.5 马氏正钳蝎毒液蛋白的分子量图谱 | 第74-76页 |
| 2.4 讨论 | 第76-79页 |
| 第3章 马氏正钳蝎脂解活性肽的表达与功能研究 | 第79-106页 |
| 3.1 前言 | 第79-80页 |
| 3.2 材料与方法 | 第80-89页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第80页 |
| 3.2.2 实验设备 | 第80-81页 |
| 3.2.3 马氏正钳蝎脂解活性肽重组表达载体的构建 | 第81-85页 |
| 3.2.4 马氏正钳蝎脂解活性肽的表达与纯化 | 第85-88页 |
| 3.2.4.1 LVP-α链的表达与纯化 | 第85-86页 |
| 3.2.4.2 LVP-β链的表达与纯化 | 第86-87页 |
| 3.2.4.3 LVP-α链和LVP-β链的异源二聚体构建 | 第87-88页 |
| 3.2.5 马氏正钳蝎脂解活性肽的功能研究 | 第88-89页 |
| 3.2.5.1 脂解活性实验 | 第88-89页 |
| 3.3 实验结果 | 第89-103页 |
| 3.3.1 马氏正钳蝎脂解活性肽序列分析 | 第89-90页 |
| 3.3.2 马氏正钳蝎脂解活性肽在粗毒中的定位与鉴定 | 第90-92页 |
| 3.3.3 马氏正钳蝎脂解活性肽重组表达载体的构建 | 第92-93页 |
| 3.3.4 马氏正钳蝎脂解活性肽表达条件的摸索 | 第93-95页 |
| 3.3.5 马氏正钳蝎脂解活性肽的初步表达与纯化 | 第95-99页 |
| 3.3.5.1 RP-HPLC分离图谱及质谱鉴定 | 第95-97页 |
| 3.3.5.2 凝胶电泳分析及质谱鉴定 | 第97-99页 |
| 3.3.6 马氏正钳蝎脂解活性肽的制备型表达 | 第99-101页 |
| 3.3.6.1 LVP-α的制备表达 | 第99-101页 |
| 3.3.6.2 LVP-β的制备表达 | 第101页 |
| 3.3.7 马氏正钳蝎脂解活性肽异源二聚体的构建 | 第101-102页 |
| 3.3.8 马氏正钳蝎脂解活性肽的脂解功能研究 | 第102-103页 |
| 3.4 讨论 | 第103-106页 |
| 第4章 蝎毒抗菌肽ABP-W1治疗糖尿病足的蛋白质组学研究 | 第106-140页 |
| 4.1 前言 | 第106-107页 |
| 4.2 材料与方法 | 第107-112页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第107-108页 |
| 4.2.2 样本来源的患者信息 | 第108页 |
| 4.2.3 实验样本的采集和处理 | 第108-109页 |
| 4.2.4 渗出液样品的SDS-PAGE分离 | 第109页 |
| 4.2.5 细菌计数与菌种鉴定 | 第109页 |
| 4.2.6 高丰度蛋白耗减 | 第109-110页 |
| 4.2.7 样品8通道iTRAQ标记 | 第110页 |
| 4.2.8 高pH RPLC分离 | 第110页 |
| 4.2.9 低pH nanoRPLC-MS/MS分析 | 第110页 |
| 4.2.10 数据库搜索 | 第110-111页 |
| 4.2.11 蛋白质定性质控 | 第111页 |
| 4.2.12 蛋白质定量质控 | 第111页 |
| 4.2.13 生物信息学分析 | 第111-112页 |
| 4.3 实验结果 | 第112-137页 |
| 4.3.1 ABP-W1不同治疗时期糖尿病足溃疡创面的变化 | 第112-113页 |
| 4.3.2 糖尿病足溃疡创面的细菌学鉴定 | 第113-115页 |
| 4.3.3 糖尿病足溃疡渗出液的SDS-PAGE分离 | 第115页 |
| 4.3.4 糖尿病足溃疡渗出液中高丰度蛋白的耗减 | 第115-116页 |
| 4.3.5 糖尿病足溃疡渗出液的质谱鉴定 | 第116-121页 |
| 4.3.5.1 实验设计及质谱鉴定结果统计 | 第116-117页 |
| 4.3.5.2 质谱数据的定性质控 | 第117-119页 |
| 4.3.5.3 质谱数据的定量质控 | 第119-121页 |
| 4.3.6 糖尿病足溃疡渗出液的蛋白定性鉴定 | 第121页 |
| 4.3.7 ABP-W1不同治疗时期的渗出液间差异蛋白的定量分析 | 第121-137页 |
| 4.3.7.1 差异蛋白的统计结果 | 第121-122页 |
| 4.3.7.2 差异蛋白的功能注释 | 第122-128页 |
| 4.3.7.3 差异蛋白涉及的经典通路分析 | 第128-133页 |
| 4.3.7.4 差异蛋白的上游转录调控分析 | 第133-135页 |
| 4.3.7.5 差异蛋白的相互作用网络 | 第135-137页 |
| 4.4 讨论 | 第137-140页 |
| 研究总结与展望 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-164页 |
| 附录 | 第164-237页 |
| 攻博期间发表和待发表的文章 | 第237-238页 |
| 致谢 | 第238-239页 |
