| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-27页 |
| 一 Neuropilin-2概述 | 第15-24页 |
| 1 NRPs的结构 | 第15-16页 |
| 1.1 NRPs基因结构 | 第15页 |
| 1.2 NRPs蛋白结构 | 第15-16页 |
| 2 NRP-2的表达 | 第16-17页 |
| 2.1 NRP-2在正常组织中的表达 | 第16-17页 |
| 2.2 NRP-2在肿瘤中的表达 | 第17页 |
| 3 NRP-2的功能 | 第17-20页 |
| 3.1 NRP-2与肿瘤发生发展 | 第17-19页 |
| 3.2 NRP-2与免疫系统 | 第19-20页 |
| 3.3 NRP-2与淋巴管系统 | 第20页 |
| 4 NRP-2的共受体与配体 | 第20-23页 |
| 4.1 SEMA | 第20-21页 |
| 4.2 Plexins | 第21页 |
| 4.3 VEGFR | 第21-22页 |
| 4.4 Integrin | 第22页 |
| 4.5 TGFR | 第22-23页 |
| 4.6 HGF和c-met | 第23页 |
| 5 NRP-2靶向性药物 | 第23-24页 |
| 二 肺癌概述 | 第24-25页 |
| 三 Neuropilin-2与肺癌 | 第25页 |
| 四 肿瘤放射免疫显像 | 第25-26页 |
| 五 研究目的及内容 | 第26-27页 |
| 第一章 NRP-2 mAb的制备、纯化及鉴定 | 第27-39页 |
| 一、材料与方法 | 第27-35页 |
| 1 材料 | 第27-31页 |
| 1.1 细胞株及实验动物 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第27-28页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第28页 |
| 1.4 主要溶液的配置 | 第28-31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| 2.1 抗NRP-2杂交瘤细胞的培养 | 第31-32页 |
| 2.2 抗体的生产 | 第32页 |
| 2.3 抗体的纯化 | 第32-33页 |
| 2.4 抗体的透析和冻 | 第33页 |
| 2.5 抗体纯度的分析 | 第33-34页 |
| 2.6 抗体浓度的测定 | 第34页 |
| 2.7 间接ELSIA | 第34-35页 |
| 二、结果与分析 | 第35-37页 |
| 1 纯度的鉴定 | 第35-36页 |
| 2 间接ELSIA | 第36-37页 |
| 三、讨论 | 第37-39页 |
| 第二章 肺癌细胞上NRP-2的表达 | 第39-55页 |
| 一、材料与方法 | 第39-49页 |
| 1 材料 | 第39-43页 |
| 1.1 细胞株 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第39-40页 |
| 1.3 主要设备及器材 | 第40页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第40-43页 |
| 2 方法 | 第43-49页 |
| 2.1 qPCR | 第43-45页 |
| 2.1.1 提取细胞RNA | 第43页 |
| 2.1.2 反转录合成cDNA | 第43-44页 |
| 2.1.3 PCR扩增 | 第44页 |
| 2.1.4 PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 2.1.5 qPCR定量检测mRNA表达量 | 第45页 |
| 2.2 Western Blotting | 第45-46页 |
| 2.2.1 提取细胞总蛋白 | 第45-46页 |
| 2.2.2 BCA法测细胞蛋白含量 | 第46页 |
| 2.2.3 Weston Blotting | 第46页 |
| 2.3 流式细胞术 | 第46-47页 |
| 2.4 免疫荧光 | 第47-48页 |
| 2.5 HE染色和免疫组织化学染色 | 第48-49页 |
| 2.5.1 HE染色 | 第48-49页 |
| 2.5.2 免疫组织化学染色 | 第49页 |
| 二、结果与分析 | 第49-53页 |
| 1 实时定量PCR | 第49-50页 |
| 2 western blotting | 第50-51页 |
| 3 流式细胞术 | 第51页 |
| 4 免疫荧光 | 第51-52页 |
| 5 HE染色和免疫组织化学染色 | 第52-53页 |
| 三、讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 ~(13)I标记NRP-2mAb及体内外实验 | 第55-65页 |
| 一、材料与方法 | 第55-58页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第55页 |
| 1.2 主要仪器及设备 | 第55页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| 2.1 氯胺T法标记抗NRP-2 mAb | 第56页 |
| 2.2 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb稳定性测定 | 第56页 |
| 2.3 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb细胞摄取实验 | 第56-57页 |
| 2.4 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb细胞竞争实验 | 第57页 |
| 2.5 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb在荷瘤裸鼠体内的生物分布 | 第57-58页 |
| 2.6 荷瘤裸鼠SPECT显像 | 第58页 |
| 二、结果与分析 | 第58-63页 |
| 1 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb的制备 | 第58-59页 |
| 2 ~(131)I-anti-NRP-2mAb细胞结合实验 | 第59-60页 |
| 3 ~(131)I-anti-NRP-2mAb在荷瘤裸鼠体内生物分布 | 第60-62页 |
| 4 荷瘤裸鼠SPECT显像 | 第62-63页 |
| 三、讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 ~(131)I-anti-NRP-2 mAb对肺癌移植瘤的生长抑制 | 第65-71页 |
| 一、材料与方法 | 第65-66页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第65页 |
| 1.2 主要仪器及设备 | 第65页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 2.1 移植瘤的生长 | 第65-66页 |
| 2.2 HE染色 | 第66页 |
| 2.3 免疫组织化学染色 | 第66页 |
| 二、结果与分析 | 第66-70页 |
| 1 肿瘤生长抑制情况 | 第66-68页 |
| 2 HE染色 | 第68-69页 |
| 3 免疫组织化学染色 | 第69-70页 |
| 三、讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 本文存在的问题及今后开展的研究 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 研究生在学期间发表的主要学术论文目录 | 第80页 |
