| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-45页 |
| 1. 基因编辑系统 | 第15-27页 |
| 1.1 Red同源重组系统 | 第15-18页 |
| 1.2 CRISPR-Cas9基因编辑系统 | 第18-27页 |
| 2. 抗体的结构和功能 | 第27-30页 |
| 2.1 抗体的结构 | 第27-29页 |
| 2.2 抗体的功能 | 第29-30页 |
| 3. 基因工程抗体表达系统 | 第30-33页 |
| 3.1 真核表达系统 | 第30-32页 |
| 3.2 原核表达系统 | 第32-33页 |
| 4. 大肠杆菌细胞质中二硫键形成研究进展 | 第33-37页 |
| 4.1 二硫键与蛋白质结构和功能的关系 | 第33-34页 |
| 4.2 大肠杆菌细胞质中二硫键的形成 | 第34-35页 |
| 4.3 DsbC对二硫键形成的影响 | 第35-37页 |
| 5. 蛋白质糖基化研究进展 | 第37-43页 |
| 5.1 糖基化的生物学功能 | 第37-38页 |
| 5.2 N-连接糖基化途径 | 第38-40页 |
| 5.3 大肠杆菌糖基化系统构建 | 第40-42页 |
| 5.4 抗体的糖基化修饰 | 第42-43页 |
| 6. 本研究目的、思路和意义 | 第43-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-69页 |
| 1 材料 | 第45-56页 |
| 1.1 主要仪器 | 第45-47页 |
| 1.2 试剂和材料 | 第47-48页 |
| 1.3 常规溶液及培养基配置 | 第48-53页 |
| 1.4 软件 | 第53页 |
| 1.5 分子克隆所用引物 | 第53-56页 |
| 2 方法 | 第56-69页 |
| 2.1 分子克隆常用方法 | 第56-61页 |
| 2.2 蛋白质表达与纯化常用方法 | 第61-63页 |
| 2.3 蛋白质性质检测常用方法 | 第63-66页 |
| 2.4 细胞培养及抗体中和活性评价 | 第66-69页 |
| 第三章 结果与分析 | 第69-106页 |
| 1 大肠杆菌基因组上细胞质二硫键形成相关基因编辑 | 第69-84页 |
| 1.1 硫氧还蛋白还原酶基因trxB的敲除 | 第69-72页 |
| 1.2 谷胱甘肽还原酶基因gor的敲除 | 第72-75页 |
| 1.3 二硫键异构酶基因DsbC基因组整合表达 | 第75-82页 |
| 1.4 第一部分小结 | 第82-84页 |
| 2 抗体轻链、重链共表达系统建立及抗体表达纯化 | 第84-93页 |
| 2.1 全长抗体轻链、重链共表达质粒构建 | 第84-86页 |
| 2.2 抗体轻重链共表达菌株构建及菌株性状监测 | 第86-88页 |
| 2.3 全长抗体23E7与HUE6F6表达及纯化 | 第88-91页 |
| 2.4 第二部分小结 | 第91-93页 |
| 3 不同来源抗体23E7及HUE6F6的性质鉴定 | 第93-98页 |
| 3.1 抗体23E7及HUE6F6分子排阻色谱分析 | 第93-94页 |
| 3.2 抗体23E7及HUE6F6沉降系数及相对分子质量分析 | 第94-96页 |
| 3.3 抗体23E7及HUE6F6与抗原结合活性的评价 | 第96-97页 |
| 3.4 抗体23E7及HUE6F6病毒中和活性评价 | 第97-98页 |
| 3.5 第三部分小结 | 第98页 |
| 4 大肠杆菌糖基化系统构建的初步尝试 | 第98-106页 |
| 4.1 O-抗原连接酶编码基因waaL的敲除 | 第99-101页 |
| 4.2 空肠弯曲菌pglB基因的引入 | 第101-103页 |
| 4.3 糖蛋白表达的初步尝试 | 第103-105页 |
| 4.4 第四部分小结 | 第105-106页 |
| 第四章 讨论 | 第106-110页 |
| 1 基因编辑系统的选择和优化 | 第106-107页 |
| 2 大肠杆菌细胞质中二硫键形成菌株研究现状及比较 | 第107页 |
| 3 大肠杆菌中全长抗体表达条件的优化 | 第107-108页 |
| 4 原核生物糖基化修饰系统及其应用前景 | 第108-110页 |
| 第五章 小结与展望 | 第110-112页 |
| 1 小结 | 第110页 |
| 2 展望 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
