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河北保定地区奶牛源微小隐孢子虫分离鉴定及CP23蛋白免疫原性分析

摘要第4-5页
abstract第5-6页
1 引言第10-16页
    1.1 隐孢子虫概述第10-15页
        1.1.1 病原学研究第10-11页
        1.1.2 生活史第11页
        1.1.3 流行特点第11页
        1.1.4 表面粘附蛋白第11-12页
        1.1.5 实验室诊断技术第12-14页
        1.1.6 疫苗研究进展第14-15页
    1.2 研究目的与意义第15-16页
2 材料与方法第16-35页
    2.1 材料第16-19页
        2.1.1 虫株与载体第16页
        2.1.2 实验动物第16页
        2.1.3 主要试剂与试剂盒第16-17页
        2.1.4 主要仪器第17页
        2.1.5 主要溶液的配制第17-19页
        2.1.6 数据分析第19页
    2.2 隐孢子虫分离与鉴定第19-22页
        2.2.1 隐孢子虫卵囊的分离与镜检第19-20页
        2.2.2 隐孢子虫PCR鉴定第20-22页
        2.2.3 pEASY-18SrRNA质粒构建及序列测序第22页
    2.3 18 SrRNA荧光定量PCR方法的建立第22-24页
        2.3.1 荧光定量PCR引物验证第22-23页
        2.3.2 反应条件的优化第23页
        2.3.3 标准曲线的建立第23页
        2.3.4 特异性分析第23-24页
        2.3.5 重复性分析第24页
        2.3.6 荧光定量PCR方法临床应用第24页
    2.4 原核表达载体的构建与蛋白表达第24-31页
        2.4.1 pEASY-CP23克隆质粒的构建及鉴定第24-27页
        2.4.2 pET28-CP23表达质粒构建及鉴定第27-28页
        2.4.3 重组菌诱导表达及鉴定第28-31页
    2.5 CP23蛋白免疫原性分析第31-35页
        2.5.1 动物分组及血清制备第31页
        2.5.2 体液免疫水平检测第31-33页
        2.5.3 细胞免疫水平检测第33-35页
3.结果第35-61页
    3.1 隐孢子虫分离鉴定结果第35-37页
        3.1.1 卵囊分离与镜检结果第35页
        3.1.2 18 SrRNA基因PCR扩增结果第35-36页
        3.1.3 pEASY-18SrRNA测序结果第36-37页
    3.2 荧光定量PCR方法的建立第37-42页
        3.2.1 荧光定量PCR引物验证第37页
        3.2.2 荧光定量PCR条件的优化第37-39页
        3.2.3 扩增曲线的绘制第39页
        3.2.4 特异性分析第39-40页
        3.2.5 重复性分析结果第40页
        3.2.6 临床样品检测结果第40-42页
    3.3 pET28a-CP23载体构建与蛋白表达结果第42-48页
        3.3.1 pEASY-CP23质粒的鉴定结果第42-44页
        3.3.2 pET28-CP23质粒鉴定结果第44-45页
        3.3.3 重组菌诱导表达及鉴定结果第45-48页
    3.4 CP23蛋白免疫原性分析第48-61页
        3.4.1 IgG抗体水平变化分析第48-54页
        3.4.2 CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量的变化第54-55页
        3.4.3 脾淋巴细胞增殖试验结果第55-56页
        3.4.4 细胞因子检测结果第56-61页
4.讨论第61-64页
5.结论第64-65页
参考文献第65-70页
作者简介第70-71页
在读期间发表的学术论文第71-73页
致谢第73-74页
中文详细摘要第74-75页

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