| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 隐孢子虫概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 病原学研究 | 第10-11页 |
| 1.1.2 生活史 | 第11页 |
| 1.1.3 流行特点 | 第11页 |
| 1.1.4 表面粘附蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.5 实验室诊断技术 | 第12-14页 |
| 1.1.6 疫苗研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-35页 |
| 2.1 材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 虫株与载体 | 第16页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.5 主要溶液的配制 | 第17-19页 |
| 2.1.6 数据分析 | 第19页 |
| 2.2 隐孢子虫分离与鉴定 | 第19-22页 |
| 2.2.1 隐孢子虫卵囊的分离与镜检 | 第19-20页 |
| 2.2.2 隐孢子虫PCR鉴定 | 第20-22页 |
| 2.2.3 pEASY-18SrRNA质粒构建及序列测序 | 第22页 |
| 2.3 18 SrRNA荧光定量PCR方法的建立 | 第22-24页 |
| 2.3.1 荧光定量PCR引物验证 | 第22-23页 |
| 2.3.2 反应条件的优化 | 第23页 |
| 2.3.3 标准曲线的建立 | 第23页 |
| 2.3.4 特异性分析 | 第23-24页 |
| 2.3.5 重复性分析 | 第24页 |
| 2.3.6 荧光定量PCR方法临床应用 | 第24页 |
| 2.4 原核表达载体的构建与蛋白表达 | 第24-31页 |
| 2.4.1 pEASY-CP23克隆质粒的构建及鉴定 | 第24-27页 |
| 2.4.2 pET28-CP23表达质粒构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4.3 重组菌诱导表达及鉴定 | 第28-31页 |
| 2.5 CP23蛋白免疫原性分析 | 第31-35页 |
| 2.5.1 动物分组及血清制备 | 第31页 |
| 2.5.2 体液免疫水平检测 | 第31-33页 |
| 2.5.3 细胞免疫水平检测 | 第33-35页 |
| 3.结果 | 第35-61页 |
| 3.1 隐孢子虫分离鉴定结果 | 第35-37页 |
| 3.1.1 卵囊分离与镜检结果 | 第35页 |
| 3.1.2 18 SrRNA基因PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| 3.1.3 pEASY-18SrRNA测序结果 | 第36-37页 |
| 3.2 荧光定量PCR方法的建立 | 第37-42页 |
| 3.2.1 荧光定量PCR引物验证 | 第37页 |
| 3.2.2 荧光定量PCR条件的优化 | 第37-39页 |
| 3.2.3 扩增曲线的绘制 | 第39页 |
| 3.2.4 特异性分析 | 第39-40页 |
| 3.2.5 重复性分析结果 | 第40页 |
| 3.2.6 临床样品检测结果 | 第40-42页 |
| 3.3 pET28a-CP23载体构建与蛋白表达结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 pEASY-CP23质粒的鉴定结果 | 第42-44页 |
| 3.3.2 pET28-CP23质粒鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组菌诱导表达及鉴定结果 | 第45-48页 |
| 3.4 CP23蛋白免疫原性分析 | 第48-61页 |
| 3.4.1 IgG抗体水平变化分析 | 第48-54页 |
| 3.4.2 CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第54-55页 |
| 3.4.3 脾淋巴细胞增殖试验结果 | 第55-56页 |
| 3.4.4 细胞因子检测结果 | 第56-61页 |
| 4.讨论 | 第61-64页 |
| 5.结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 中文详细摘要 | 第74-75页 |
