| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-28页 |
| 1.1 FEN1的结构与基本特性 | 第11-14页 |
| 1.1.1 FEN1的发现过程 | 第11页 |
| 1.1.2 FEN1的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 FEN1的生化特点和底物选择性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 FEN1与底物结合的晶体结构 | 第13-14页 |
| 1.2 FEN1生化功能的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 FEN1参与冈崎片段的成熟过程 | 第14-15页 |
| 1.2.2 FEN1参与碱基切除修复途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 FEN1在其他修复途径中的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.4 FEN1在其他DNA代谢中的功能 | 第17-20页 |
| 1.3 FEN1体内调节机制的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 FEN1与其他蛋白相互作用 | 第20-22页 |
| 1.3.2 FEN1在细胞内的区室化 | 第22-24页 |
| 1.3.3 FEN1的翻译后修饰 | 第24-25页 |
| 1.4 FEN1与癌症发生之间的关系 | 第25-26页 |
| 1.5 FEN1抑制剂 | 第26页 |
| 1.6 本章小结 | 第26-28页 |
| 第2章 HSP70与FEN1相互作用并促进FEN1的活性 | 第28-39页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2.2 FEN1活性测定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 Western blotting | 第30-31页 |
| 2.2.4 体外Pull down分析 | 第31页 |
| 2.2.5 免疫沉淀(IP) | 第31-32页 |
| 2.2.6 NTAP串联亲和纯化 | 第32页 |
| 2.2.7 M2纯化 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-37页 |
| 2.3.1 与FEN1相互作用的蛋白复合物的纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.2 FEN1直接与HSP70相互作用 | 第34-35页 |
| 2.3.3 HSP70促进FEN1的活性 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 FEN1点突变L209P影响LP-BER并诱导细胞转化 | 第39-83页 |
| 3.1 引言 | 第39-41页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第41-55页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第41-44页 |
| 3.2.1.1 实验中用到的底物序列 | 第41页 |
| 3.2.1.2 抗体、细胞和动物 | 第41-42页 |
| 3.2.1.3 实验中用到的试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.1.4 所需相关溶液配置 | 第43-44页 |
| 3.2.2 寡核苷酸链同位素标记 | 第44-45页 |
| 3.2.2.1 寡核苷酸链同位素5'标记 | 第44-45页 |
| 3.2.2.2 寡核苷酸链同位素3'标记 | 第45页 |
| 3.2.3 FEN1点突变体表达载体的构建以及蛋白表达 | 第45-48页 |
| 3.2.4 FEN1核酸酶活性分析 | 第48页 |
| 3.2.5 体外重构BER | 第48-49页 |
| 3.2.6 FEN1与DNA的结合能力分析(ELISA法) | 第49页 |
| 3.2.7 FEN1与DNA的结合能力分析(gel shift凝胶迁移法) | 第49页 |
| 3.2.8 稳转细胞系的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.9 亲和沉淀(Pull down) | 第51页 |
| 3.2.10 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) | 第51-52页 |
| 3.2.11 DNA损伤试剂处理细胞 | 第52页 |
| 3.2.12 流式分析检测 | 第52页 |
| 3.2.13 免疫荧光 | 第52-53页 |
| 3.2.14 单细胞碱性凝胶电泳 | 第53-54页 |
| 3.2.15 核型分析 | 第54页 |
| 3.2.16 细胞平板克隆形成实验 | 第54页 |
| 3.2.17 软琼脂克隆形成实验 | 第54-55页 |
| 3.2.18 异源体成瘤 | 第55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-80页 |
| 3.3.1 在结直肠癌中检测到FEN1点突变 | 第55-56页 |
| 3.3.2 L209P点突变蛋白活性初步测定 | 第56-59页 |
| 3.3.3 点突变L209P极大的降低了FEN1的三种核酸酶活性 | 第59-61页 |
| 3.3.4 L209P突变不影响蛋白之间的相互作用 | 第61-63页 |
| 3.3.5 L209P FEN1仍然具有完整的DNA底物结合能力 | 第63-65页 |
| 3.3.6 L209P FEN1影响野生型FEN1蛋白的核酸酶活性 | 第65-67页 |
| 3.3.7 L209P FEN1影响BER效率 | 第67-70页 |
| 3.3.8 L209P FEN1的表达使得细胞对DNA损伤更加敏感 | 第70-73页 |
| 3.3.9 L209P FEN1引起内源性的DNA损伤 | 第73-76页 |
| 3.3.10 FEN1 L209P引起染色体异常 | 第76-77页 |
| 3.3.11 L209P FEN1的表达促进细胞克隆形成 | 第77-79页 |
| 3.3.12 L209P突变诱导细胞异源体成瘤 | 第79-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 抑制FEN1活性可以阻碍乳腺癌细胞增殖 | 第83-102页 |
| 4.1 引言 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第84-86页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第84页 |
| 4.2.2 免疫组化 | 第84-85页 |
| 4.2.3 DNA复制效率分析 | 第85页 |
| 4.2.4 冈崎片段成熟分析 | 第85页 |
| 4.2.5 体内8-oxo-dG BER分析 | 第85页 |
| 4.2.6 HR报告分析 | 第85-86页 |
| 4.2.7 DNA损伤试剂处理细胞 | 第86页 |
| 4.2.8 异源体成瘤 | 第86页 |
| 4.3 实验结果 | 第86-100页 |
| 4.3.1 FEN1在乳腺癌细胞中高表达并且与恶性肿瘤相关 | 第86-89页 |
| 4.3.2 FEN1高表达促进细胞生长并诱导foci形成 | 第89-90页 |
| 4.3.3 改变FEN1在细胞中的表达水平会改变癌细胞对于化疗药物的反应 | 第90-91页 |
| 4.3.4 抑制FEN1活性的小分子化合物的筛选 | 第91-94页 |
| 4.3.5 SC13影响冈崎片段的成熟和LP-BER | 第94-96页 |
| 4.3.6 SC13阻碍DNA复制并抑制细胞生长 | 第96页 |
| 4.3.7 SC13导致细胞内DSBs和染色体断裂的产生 | 第96-98页 |
| 4.3.8 SC13诱导细胞毒性 | 第98-99页 |
| 4.3.9 SC13增加癌细胞对化疗药物的敏感性 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-102页 |
| 第5章 总结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-127页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
