| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 松褐天牛研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 昆虫的嗅觉 | 第14-18页 |
| 1.2.1 昆虫的嗅觉感器 | 第14页 |
| 1.2.2 昆虫的嗅觉相关蛋白 | 第14-16页 |
| 1.2.2.1 气味结合蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 化学感受蛋白 | 第16页 |
| 1.2.3 小分子与结合蛋白相互作用的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.3.1 荧光竞争性结合 | 第17页 |
| 1.2.3.2 荧光猝灭 | 第17-18页 |
| 1.2.3.3 表观结合常数及结合位点数分析 | 第18页 |
| 1.2.3.4 热力学参数判断作用力类型 | 第18页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第18-20页 |
| 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 MaltOBPs在触角感器中的定位 | 第21-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-25页 |
| 2.1.1 试虫 | 第21页 |
| 2.1.2 所用试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 松褐天牛触角感器的扫描电镜观察 | 第22页 |
| 2.1.5 MaltOBPs的免疫组织定位 | 第22-25页 |
| 2.1.5.1 抗原的制备 | 第22页 |
| 2.1.5.2 多克隆抗体的制备(委托南京金斯瑞生物科技有限公司完成) | 第22-23页 |
| 2.1.5.3 触角组织总蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.1.5.4 蛋白浓度的测定 | 第23页 |
| 2.1.5.5 WesternBlot检测抗体特异性 | 第23-24页 |
| 2.1.5.6 触角组织的包埋和切片 | 第24页 |
| 2.1.5.7 切片的免疫组化处理及透射电镜观察 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-36页 |
| 2.2.1 松褐天牛触角感器的扫描电镜观察 | 第25-29页 |
| 2.2.1.1 刺形感器 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 毛形感器 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 锥形感器 | 第27页 |
| 2.2.1.4 耳形感器 | 第27页 |
| 2.2.1.5 钟形感器 | 第27-28页 |
| 2.2.1.6 布氏鬃毛 | 第28页 |
| 2.2.1.7 Y型感器 | 第28-29页 |
| 2.2.2 MaltOBPs的免疫组织定位 | 第29-36页 |
| 2.2.2.1 触角蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 WesternBlot | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 免疫电镜定位 | 第31-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 MaltOBPs基因在触角中的表达及RNA干扰效应 | 第37-52页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-46页 |
| 3.1.1 试虫 | 第37页 |
| 3.1.2 所用试剂及试剂盒 | 第37-38页 |
| 3.1.3 所用仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 TotalRNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.1.5 cDNA的合成 | 第39页 |
| 3.1.6 五个MaltOBPs基因在雌雄成虫触角中的定量分析 | 第39-41页 |
| 3.1.7 dsRNA的合成 | 第41-46页 |
| 3.1.7.1 模板质粒的合成 | 第41-44页 |
| 3.1.7.2 模板的合成 | 第44页 |
| 3.1.7.3 体外转录合成dsRNA | 第44-45页 |
| 3.1.7.4 dsRNA的酚氯仿抽提 | 第45-46页 |
| 3.1.8 三个MaltOBPs基因的RNA干扰效应 | 第46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.2.1 五个MaltOBPs基因在雌雄成虫触角中的定量分析 | 第46-49页 |
| 3.2.2 五个MaltOBPs基因的dsRNA合成 | 第49页 |
| 3.2.3 三个MaltOBPs基因的RNA干扰效应 | 第49-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 MaltCSPs的体外表达纯化及结合特性分析 | 第52-80页 |
| 4.1 材料与方法 | 第52-60页 |
| 4.1.1 试虫 | 第52页 |
| 4.1.2 所用试剂及试剂盒 | 第52-53页 |
| 4.1.3 所用仪器 | 第53页 |
| 4.1.4 TotalRNA的提取及cDNA的合成 | 第53页 |
| 4.1.5 MaltCSP7与MaltCSP8编码基因的克隆与重组质粒的构建 | 第53-55页 |
| 4.1.5.1 目的基因片段的PCR扩增与纯化 | 第53-54页 |
| 4.1.5.2 线性载体的制备 | 第54页 |
| 4.1.5.3 目的片段与表达载体的重组 | 第54-55页 |
| 4.1.5.4 重组产物转化(大肠杆菌感受态细胞Dh5α)及鉴定 | 第55页 |
| 4.1.6 MaltCSP7与MaltCSP8的原核表达及纯化 | 第55-58页 |
| 4.1.6.1 重组质粒抽提 | 第55页 |
| 4.1.6.2 重组质粒转化(表达菌株BL21(DE3))及鉴定 | 第55-56页 |
| 4.1.6.3 IPTG诱导融合蛋白试表达 | 第56页 |
| 4.1.6.4 IPTG诱导融合蛋白大量表达 | 第56页 |
| 4.1.6.5 表达在沉淀的融合蛋白的变复性 | 第56-57页 |
| 4.1.6.6 融合蛋白的镍柱亲和层系纯化 | 第57-58页 |
| 4.1.7 蛋白浓度测定 | 第58页 |
| 4.1.8 MaltCSP8与16种物质的结合作用分析 | 第58-60页 |
| 4.1.8.1 荧光探针的适合性测验 | 第58页 |
| 4.1.8.2 荧光竞争结合 | 第58-59页 |
| 4.1.8.3 荧光猝灭 | 第59-60页 |
| 4.2 结果与分析 | 第60-78页 |
| 4.2.1 MaltCSP7与MaltCSP8基本信息 | 第60页 |
| 4.2.2 MaltCSP7与MaltCSP8编码基因的克隆与重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| 4.2.3 MaltCSP7与MaltCSP8的原核表达及纯化 | 第61-62页 |
| 4.2.4 MaltCSP8的浓度测定 | 第62-63页 |
| 4.2.5 MaltCSP8与16种物质的荧光竞争结合 | 第63-66页 |
| 4.2.5.1 荧光探针的适合性测验 | 第63-64页 |
| 4.2.5.2 荧光竞争结合 | 第64-66页 |
| 4.2.6 荧光猝灭 | 第66-78页 |
| 4.2.6.1 猝灭类型分析 | 第66页 |
| 4.2.6.2 表观结合常数与结合位点数分析 | 第66-75页 |
| 4.2.6.3 作用力分析 | 第75-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 松褐天牛雌雄成虫对气味物质的行为反应 | 第80-85页 |
| 5.1 材料与方法 | 第80-81页 |
| 5.1.1 试虫 | 第80-81页 |
| 5.1.2 所用试剂及试剂盒 | 第81页 |
| 5.1.3 所用仪器 | 第81页 |
| 5.1.4 Y-型嗅觉仪对体外结合能力较强物质的检测 | 第81页 |
| 5.2 结果与分析 | 第81-83页 |
| 5.3 讨论 | 第83-85页 |
| 第六章 结果与展望 | 第85-87页 |
| 6.1 主要结果 | 第85-86页 |
| 6.2 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
