| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 金属蛋白酶的研究概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 蛋白酶的简介 | 第12页 |
| 1.1.2 金属蛋白酶的研究概况 | 第12-14页 |
| 1.2 微生物金属蛋白酶的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 微生物金属蛋白酶的多样性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 微生物金属蛋白酶的生化特性 | 第15页 |
| 1.2.3 微生物金属蛋白酶的应用 | 第15页 |
| 1.3 沙雷氏菌中蛋白酶的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 沙雷氏菌的简介 | 第16页 |
| 1.3.2 沙雷氏菌胞外蛋白酶的研究概况 | 第16-18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 FS14△serralysin无痕缺失突变株的构建及胞外蛋白酶热稳定性的测定 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 Serratia sp. FS14粗酶液中蛋白酶热稳定性的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.2 无痕缺失突变株FS14△serralysin的构建 | 第22-25页 |
| 2.2.3 FS14△serralysin粗酶液中蛋白酶热稳定性的测定 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 Serratia sp. FS14粗酶液中蛋白酶热稳定性的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 同源重组自杀质粒pWDF-Serralysin的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 无痕缺失突变株FS14△serralysin的构建与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.4 FS14△serralysin粗酶液中蛋白酶热稳定性的测定 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-32页 |
| 第三章 FS14△serralysin中50 kDa耐高温蛋白酶的分离纯化、鉴定及酶学特性研究 | 第32-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 FS14△serralysin中耐高温蛋白酶的分离纯化与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.2 50 kDa耐高温蛋白酶的质谱鉴定 | 第34页 |
| 3.2.3 50kDa耐高温蛋白酶的酶学特性研究 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 耐高温蛋白酶的分离纯化 | 第35-39页 |
| 3.3.2 50 kDa蛋白的质谱鉴定 | 第39页 |
| 3.3.3 耐高温的SPB蛋白酶的酶学特性研究 | 第39-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 突变株FS14△serralysin△SPB的构建及重组SPB的克隆、表达、纯化及酶学特性的研究 | 第44-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 4.1.2 培养基 | 第44页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第44-45页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 4.2.1 突变株FS14△serralysin△SPB的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.2 突变株FS14△serralysin△SPB粗酶液中蛋白酶热稳定性的测定 | 第46页 |
| 4.2.3 重组表达质粒pEX18km-SPB的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.4 重组SPB的表达与纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.5 定点突变体E176A的克隆、表达、纯化及蛋白酶活性的测定 | 第48-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-63页 |
| 4.3.1 突变株FS14△serralysinASPB的构建及粗酶液中蛋白酶活性的测定 | 第50-53页 |
| 4.3.2 重组SPB蛋白的克隆,表达,纯化及酶学特性的研究 | 第53-59页 |
| 4.3.3 突变体E176A的克隆、表达、纯化及蛋白酶活性的测定 | 第59-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63页 |
| 4.5 小结 | 第63-64页 |
| 第五章 SPB蛋白三维结构的解析 | 第64-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 5.1.1 菌株 | 第64页 |
| 5.1.2 培养基 | 第64页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第64页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第64-65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 SPB的分离纯化 | 第65页 |
| 5.2.2 SPB蛋白结晶条件的筛选 | 第65页 |
| 5.2.3 SPB蛋白晶体的冻存 | 第65页 |
| 5.2.4 SPB蛋白晶体的X-射线衍射及数据的收集与处理 | 第65页 |
| 5.2.5 SPB蛋白晶体的解析 | 第65-66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-74页 |
| 5.3.1 SPB的纯化,结晶条件的筛选,晶体的X-射线衍射及结构的解析 | 第66-68页 |
| 5.3.2 SPB的结构 | 第68-70页 |
| 5.3.3 SPB的活性中心 | 第70-71页 |
| 5.3.4 FS14中SPB和Serralysin的比较 | 第71-73页 |
| 5.3.5 SPB中钙离子的结合特征 | 第73-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-75页 |
| 5.5 小结 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 论文创新点 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 附录 | 第84-90页 |
| 附录一 | 第84-89页 |
| 附录二 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
