| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第11-22页 |
| 1 罗非鱼养殖概况 | 第11页 |
| 2 罗非鱼链球菌病概况 | 第11-12页 |
| 3 罗非鱼链球菌病疫苗的研究概况 | 第12-15页 |
| 3.1 灭活疫苗 | 第12-14页 |
| 3.2 弱毒疫苗 | 第14页 |
| 3.3 基因工程亚单位疫苗 | 第14-15页 |
| 3.4 DNA疫苗 | 第15页 |
| 4 无乳链球菌表面蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| 4.1 Alp蛋白家族 | 第16页 |
| 4.2 β蛋白质 | 第16页 |
| 4.3 C5a肽酶 | 第16-17页 |
| 4.4 Lmb蛋白 | 第17页 |
| 4.5 Sip蛋白 | 第17页 |
| 4.6 LrrG蛋白 | 第17页 |
| 5 融合蛋白研究进展 | 第17-20页 |
| 5.1 融合基因的构建方法 | 第18页 |
| 5.2 融合基因中的Linker序列 | 第18页 |
| 5.3 融合蛋白在人类医学上的研究 | 第18-19页 |
| 5.4 融合蛋白在哺乳动物上的研究 | 第19页 |
| 5.5 融合蛋白在水产上的研究 | 第19-20页 |
| 6 无乳链球菌融合蛋白的研究概况 | 第20页 |
| 7 本试验研究的目的意义和技术路线 | 第20-22页 |
| 7.1 研究目的意义 | 第20-21页 |
| 7.2 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第一章 罗非鱼无乳链球菌LrrG-Sip融合基因原核表达载体的构建及表达 | 第22-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第22-36页 |
| 1.1 实验菌株与试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第23页 |
| 1.3 试剂的制备 | 第23-27页 |
| 1.4 LrrG、Sip基因引物设计 | 第27-28页 |
| 1.5 无乳链球菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 1.6 PCR扩增LrrG、Sip基因 | 第29页 |
| 1.7 PCR产物胶回收 | 第29-30页 |
| 1.8 PCR产物的TA克隆 | 第30页 |
| 1.9 提取质粒 | 第30-31页 |
| 1.10 pColdⅡ-Sip的构建 | 第31-32页 |
| 1.11 构建原核表达载体pColdⅡ-LrrG -Sip | 第32页 |
| 1.12 原核表达载体的诱导与SDS-PAGE分析 | 第32-36页 |
| 1.13 重组融合蛋白的纯化与Western blot检测 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-40页 |
| 2.1 Sip、LrrG基因的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2 融合基因原核表达载体pCold II-LrrG-Sip的构建 | 第37-38页 |
| 2.3 pCold II-LrrG-Sip原核表达载体的诱导表达 | 第38-40页 |
| 2.4 融合蛋白LrrG-Sip的纯化与鉴定 | 第40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 罗非鱼无乳链球菌LrrG-Sip融合蛋白免疫原性研究 | 第42-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1 实验菌株及实验动物 | 第42-43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 试剂配制 | 第43页 |
| 1.4 蛋白表达与纯化 | 第43页 |
| 1.5 免疫试验 | 第43-44页 |
| 1.6 血清抗体滴度的检测 | 第44页 |
| 1.7 血清中免疫指标及抗氧化功能的测定 | 第44-45页 |
| 1.8 数据统计与分析 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-48页 |
| 2.1 蛋白表达和纯化 | 第45页 |
| 2.2 LrrG-Sip融合蛋白免疫保护效果 | 第45-46页 |
| 2.3 血清抗体滴度的检测 | 第46页 |
| 2.4 血清溶菌酶和总超氧化物歧化酶测定分析 | 第46-47页 |
| 2.5 血清过氧化物酶和碱性磷酸酶测定分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 附录一:表达载体p Cold II图谱 | 第64-65页 |
| 附录二:在读期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
