| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 B7-H4分子的研究概况 | 第14-17页 |
| 1.1.1 B7-H4在癌症中的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.2 B7-H4的免疫诊疗作用 | 第17页 |
| 1.2 单克隆抗体技术 | 第17-18页 |
| 1.2.1 杂交瘤技术简介 | 第17页 |
| 1.2.2 单克隆抗体的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae)概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 猪肺炎支原体的流行病学 | 第18页 |
| 1.3.2 猪肺炎支原体的病原学 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 猪B7-H4分子的克隆及其组织分布 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 实验动物及组织样品采集 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 pB7-H4基因的克隆 | 第20-22页 |
| 2.2.1.1 pB7-H4基因的BLAST搜索 | 第20页 |
| 2.2.1.2 pB7-H4ORF区域引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 猪各组织总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.1.4 猪各组织总RNA的反转录反应 | 第21页 |
| 2.2.1.5 pB7-H4的ORF序列克隆鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.2 pB7-H4基因的生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.3 猪主要组织pB7-H4基因的PCR扩增方法 | 第22页 |
| 2.2.4 猪主要组织pB7-H4基因的实时荧光定量检测方法 | 第22页 |
| 2.3 结果 | 第22-27页 |
| 2.3.1 pB7-H4基因的克隆鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3.2 pB7-H4的序列分析结果 | 第23-26页 |
| 2.3.3 pB7-H4基因的组织分布 | 第26-27页 |
| 2.3.3.1 猪主要组织pB7-H4的RT-PCR扩增结果 | 第26页 |
| 2.3.3.2 猪各组织的pB7-H4荧光定量PCR结果 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 猪B7-H4的单克隆抗体制备及其在免疫细胞中的表达分析 | 第28-42页 |
| 3.1 材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 菌株、载体、主要试剂、细胞及实验动物 | 第28页 |
| 3.1.2 实验仪器和耗材 | 第28页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第28-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-36页 |
| 3.2.1 pB7-H4重组蛋白的原核表达及纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 pB7-H4胞外区基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 3.2.1.2 pET-32a-pB7-H4融合表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.1.3 pB7-H4融合蛋白的原核表达 | 第31页 |
| 3.2.1.4 融合pB7-H4蛋白的纯化 | 第31页 |
| 3.2.2 pB7-H4蛋白的动物免疫 | 第31-32页 |
| 3.2.3 细胞融合方法 | 第32-33页 |
| 3.2.3.1 SP2/0细胞培养 | 第32页 |
| 3.2.3.2 饲养层细胞的培养 | 第32页 |
| 3.2.3.3 脾细胞分离 | 第32页 |
| 3.2.3.4 脾细胞与SP2/0细胞的融合 | 第32-33页 |
| 3.2.4 杂交瘤细胞株的筛选 | 第33页 |
| 3.2.5 单克隆抗体的腹水制备及纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.5.1 单克隆抗体腹水的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.5.2 腹水中抗体的纯化 | 第34页 |
| 3.2.5.3 腹水亚类及效价鉴定 | 第34页 |
| 3.2.6 单克隆抗体的特异性检测 | 第34-35页 |
| 3.2.6.1 Westernblot检测 | 第34页 |
| 3.2.6.2 流式细胞检测 | 第34-35页 |
| 3.2.7 单克隆抗体的Cy5NHS荧光标记 | 第35页 |
| 3.2.8 猪免疫细胞上pB7-H4分子的流式细胞仪检测 | 第35-36页 |
| 3.2.8.1 猪肺泡巨噬细胞(PAM)或外周血单核细胞(PBMC)的分离 | 第35页 |
| 3.2.8.2 免疫细胞上pB7-H4分子的流式细胞仪检测 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 pET-32a-pB7-H4融合表达载体的构建 | 第36页 |
| 3.3.2 融合蛋白的表达及纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.3 动物免疫后抗体水平的检测 | 第37页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞培养上清效价检测 | 第37-38页 |
| 3.3.5 杂交瘤细胞的筛选及单抗亚类的鉴定 | 第38页 |
| 3.3.6 单抗特异性鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.7 单抗荧光标记的鉴定 | 第39页 |
| 3.3.8 pB7-H4在免疫细胞上的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 猪肺炎支原体感染下猪B7-H4分子在肺脏组织中的表达分析 | 第42-49页 |
| 4.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.1 毒株和实验动物 | 第42页 |
| 4.1.2 相关试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 4.2 方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 猪肺炎支原体的感染实验 | 第42-43页 |
| 4.2.2 猪肺炎支原体抗体检测 | 第43页 |
| 4.2.3 组织病理学和免疫组织化学检测 | 第43-44页 |
| 4.3 结果 | 第44-47页 |
| 4.3.1 猪肺炎支原体感染后的临床症状 | 第44页 |
| 4.3.2 猪肺炎支原体抗体检测结果 | 第44-45页 |
| 4.3.3 猪肺脏的病理剖检结果 | 第45-46页 |
| 4.3.4 猪肺脏组织的病理切片结果 | 第46-47页 |
| 4.3.5 猪肺炎支原体感染肺组织的免疫组化结果 | 第47页 |
| 4.4 小结 | 第47页 |
| 4.5 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
