| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-33页 |
| 1.1 单纯疱疹病毒Ⅱ型概述 | 第13页 |
| 1.2 HSV 的形态结构与基因表达 | 第13-16页 |
| 1.3 HSV-2 的潜伏复发与感染治疗 | 第16-18页 |
| 1.4 HSV ICP22 概述 | 第18-30页 |
| 1.4.1 ICP22 与 US1.5 | 第18-20页 |
| 1.4.2 ICP22 屏蔽宿主核功能以提高病毒感染 | 第20-21页 |
| 1.4.3 ICP22 与其它病毒蛋白的调控作用 | 第21-25页 |
| 1.4.4 ICP22 与细胞周期 | 第25-30页 |
| 1.5 本课题的研究意义及主要内容 | 第30-33页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第30-31页 |
| 1.5.2 本课题的研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 单纯疱疹病毒Ⅱ型感染细胞多肽 ICP22 真核表达载体的构建 | 第33-50页 |
| 2.1 前言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.3 技术路线 | 第35页 |
| 2.4 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.4.1 Vero 细胞的培养 | 第35-36页 |
| 2.4.2 HSV-2 的培养 | 第36页 |
| 2.4.3 HSV-2 基因组提取及 ICP22 序列扩增 | 第36-37页 |
| 2.4.4 凝胶电泳鉴定 PCR 产物 | 第37-38页 |
| 2.4.5 凝胶回收纯化 PCR 产物 | 第38页 |
| 2.4.6 重组质粒 pEGFPN1 的提取 | 第38-40页 |
| 2.4.7 pEGFPN1 质粒的双酶切 | 第40-41页 |
| 2.4.8 目的基因与质粒载体的连接 | 第41页 |
| 2.4.9 感受细胞的制备以及连接产物的转化 | 第41页 |
| 2.4.10 通过菌落 PCR 进行阳性克隆菌落的鉴定 | 第41页 |
| 2.4.11 重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第42-49页 |
| 2.5.1 HSV-2 对 Vero 细胞的病变作用 | 第42-43页 |
| 2.5.2 HSV-2 基因组电泳检测 | 第43页 |
| 2.5.3 ICP22 序列的 PCR 扩增 | 第43-44页 |
| 2.5.4 菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第44页 |
| 2.5.5 重组质粒 HindIII、KpnI 双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5.6 重组质粒 pEGFP-ICP22 测序鉴定 | 第45-49页 |
| 2.6 讨论 | 第49页 |
| 2.7 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型感染细胞多肽 ICP22 在 Vero 细胞中的表达及鉴定 | 第50-58页 |
| 3.1 前言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第50页 |
| 3.2.2 细胞、菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.3 技术路线 | 第51页 |
| 3.4 实验方法 | 第51-55页 |
| 3.4.1 质粒提取 | 第51-52页 |
| 3.4.2 测定质粒浓度 | 第52页 |
| 3.4.3 质粒瞬时转染 Vero 细胞 | 第52-53页 |
| 3.4.4 RT-PCR 鉴定 ICP22 的转录 | 第53-55页 |
| 3.4.5 pEGFP-ICP22 表达过程的研究 | 第55页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第55-57页 |
| 3.5.1 质粒在 Vero 细胞中的表达 | 第55页 |
| 3.5.2 RT-PCR 鉴定 ICP22 在 Vero 细胞中的转录 | 第55-56页 |
| 3.5.3 pEGFP-ICP22 在 Vero 细胞中的表达过程 | 第56-57页 |
| 3.6 讨论 | 第57页 |
| 3.7 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 单纯疱疹病毒Ⅱ型 ICP22 对 Vero 细胞周期的作用 | 第58-69页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第58页 |
| 4.2.2 细胞、菌株和质粒 | 第58-59页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第59页 |
| 4.3 技术路线 | 第59页 |
| 4.4 实验方法 | 第59-63页 |
| 4.4.1 MTT 法检测 Vero 细胞活性 | 第59-60页 |
| 4.4.2 流式检测 ICP22 对 Vero 细胞周期的影响 | 第60页 |
| 4.4.3 QPCR 检测周期蛋白的表达情况 | 第60-61页 |
| 4.4.4 Western blot 鉴定周期蛋白 E 的表达 | 第61-63页 |
| 4.4.5 统计学分析 | 第63页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第63-67页 |
| 4.5.1 ICP22 对 Vero 细胞活性的影响 | 第63页 |
| 4.5.2 ICP22 对 Vero 细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 4.5.3 周期蛋白 E、A 和 B mRNA 相对定量分析 | 第64-67页 |
| 4.5.4 Westen blot 鉴定周期蛋白 E 的表达 | 第67页 |
| 4.6 讨论 | 第67-68页 |
| 4.7 小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附件 | 第76页 |
