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血清淀粉样蛋白A诱导巨噬细胞促炎基因表达的表观遗传学调控

符号说明第8-9页
中文摘要第9-10页
ABSTRACT第10页
第一章 绪论第11-19页
    1 血清淀粉样蛋白 A 在炎症反应中的研究现状第11-14页
        1.1 血清淀粉样蛋白 A 家族简介第11-12页
        1.2 血清淀粉样蛋白 A 的结构和功能第12页
        1.3 血清淀粉样蛋白 A 的合成与代谢第12-13页
        1.4 血清淀粉样蛋白 A 与炎性疾病第13-14页
    2 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的研究现状第14-17页
        2.1 组蛋白修饰与表观遗传学第14-15页
        2.2 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的催化活性第15-16页
        2.3 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的生物学功能第16-17页
    3 选题意义和研究内容第17-19页
        3.1 选题意义第17-18页
        3.2 研究内容第18-19页
第二章 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 表达的检测第19-36页
    1 材料和仪器第19-22页
        1.1 原料与试剂第19-20页
        1.2 仪器和设备第20页
        1.3 溶液配制第20-21页
        1.4 培养基第21-22页
        1.5 小鼠第22页
        1.6 细胞第22页
    2 实验方法第22-26页
        2.1 血清淀粉样蛋白 A 诱导巨噬细胞表观遗传学相关基因表达的芯片分析第22页
        2.2 RNA 的提取(TREIZOL 抽提法)第22-23页
        2.3 将 RNA 反转录为 cDNA第23页
        2.4 实时定量 PCR 技术(Real-time PCR)第23页
        2.5 Westernblot 技术第23-24页
        2.6 从小鼠体内分离腹腔巨噬细胞第24-25页
        2.7 从小鼠体内分离骨髓巨噬细胞第25页
        2.8 siRNA 转染小鼠腹腔巨噬细胞第25-26页
    3 实验结果第26-34页
        3.1 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因的沉默效率第26-27页
        3.2 Real-time PCR 验证受 SAA 调控的表观遗传学基因第27页
        3.3 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的时间曲线第27-29页
        3.4 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的剂量曲线第29-30页
        3.5 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的受体研究第30-34页
    4 讨论第34-35页
    5 小结第35-36页
第三章 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 对下游靶基因的调控作用第36-62页
    1 材料和仪器第36-38页
        1.1 原料与试剂第36页
        1.2 仪器和设备第36-37页
        1.3 溶液配制第37页
        1.4 小鼠第37页
        1.5 细胞第37-38页
        1.6 质粒第38页
    2 实验方法第38-45页
        2.1 脂质体转染 293 细胞第38-39页
        2.2 用于逆转录病毒感染的质粒构建第39页
        2.3 用于过表达 Jmjd3 蛋白及突变蛋白的质粒构建第39-40页
        2.4 利用大肠杆菌表达纯化血清淀粉样蛋白 A第40-41页
        2.5 逆转录病毒的包装与浓缩第41-42页
        2.6 逆转录病毒感染小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 细胞第42页
        2.7 小鼠骨髓移植模型的构建第42-43页
        2.8 小鼠炎症模型的构建第43页
        2.9 流式细胞技术检测细胞因子的表达第43-44页
        2.10 小鼠眼眶静脉丛采血第44页
        2.11 小鼠血液中性粒细胞计数第44-45页
    3 实验结果第45-59页
        3.1 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因转录水平的沉默效率第45-46页
        3.2 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因蛋白水平的沉默效率第46页
        3.3 小鼠巨噬细胞过表达 Jmjd3 蛋白及其突变蛋白第46-47页
        3.4 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 IL-23,IL-12 的诱导表达第47-48页
        3.5 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 G-CSF 的诱导表达第48-49页
        3.6 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 TREM-1 的诱导表达第49-50页
        3.7 Jmjd3 基因过表达可诱导 G-CSF, IL-23, TREM-1 的合成第50-51页
        3.8 过表达 Jmjd3 突变蛋白抑制了 SAA 诱导 G-CSF, IL-23, TREM-1 的合成第51-53页
        3.9 小鼠体内实验验证 Jmjd3 在炎症模型中对 TREM-1, G-CSF, IL-23 的调控作用第53-55页
        3.10 小鼠 Jmjd3 基因调控 SAA 引起的粒细胞增多第55-56页
        3.11 小鼠 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的血细胞 G-CSF 上调第56-57页
        3.12 Jmjd3 可调控 SAA 诱导的一系列促炎因子的合成第57-59页
    4 讨论第59-61页
        4.1 病毒表达系统的选择第59-60页
        4.2 Jmjd3 蛋白 C 端(JmjC domain)的选取和突变位点的选择第60页
        4.3 流式细胞仪分析细胞内炎性因子的表达第60-61页
    5 小结第61-62页
第四章 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 对下游靶基因的调控机制第62-78页
    1 材料和仪器第62页
        1.1 原料与试剂第62页
        1.2 仪器和设备第62页
    2 实验方法第62-73页
        2.1 小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 细胞的培养、传代和冻存第62-65页
        2.2 细胞和组织核蛋白的提取方法第65-66页
        2.3 染色质免疫共沉淀第66-68页
        2.4 免疫荧光技术第68-69页
        2.5 流式细胞仪分选细胞第69-71页
        2.6 质粒的转化、扩增和测序第71-73页
    3 实验结果第73-76页
        3.1 SAA 诱导 Jmjd3 蛋白的上调与组蛋白 H3K27me3 的表达下调第73-74页
        3.2 Jmjd3 调控细胞内组蛋白 H3K27me3 的表达水平第74-75页
        3.3 Jmjd3 调控靶基因启动子区 H3K27me3 的表达水平第75-76页
    4 讨论第76-77页
    5 小结第77-78页
第五章 Jmjd3 基因在 SAA 诱导动脉粥样硬化中的调控第78-86页
    1 材料和仪器第78页
        1.1 原料与试剂第78页
        1.2 仪器和设备第78页
    2 实验方法第78-81页
        2.1 LDL 内吞进入巨噬细胞第78-79页
        2.2 巨噬细胞油红 O 染色第79-80页
        2.3 巨噬细胞泡沫化程度的检测指标第80-81页
        2.4 巨噬细胞泡沫化形成过程中促炎基因的表达检测第81页
    3 实验结果第81-85页
        3.1 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的巨噬细胞泡沫化形成第81-84页
        3.2 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导巨噬细胞泡沫化过程中炎性因子的合成第84-85页
    4 讨论第85页
    5 小结第85-86页
第六章 总结与展望第86-88页
    1 总结第86-87页
        1.1 SAA 诱导小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因的合成第86页
        1.2 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导巨噬细胞促炎因子的合成第86页
        1.3 Jmjd3 基因调控组蛋白 H3K27me3 的甲基化水平第86-87页
        1.4 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的巨噬细胞泡沫化形成第87页
    2 展望第87-88页
参考文献第88-93页
致谢第93-94页
攻读硕士期间主要研究成果第94页
    参加科研项目第94页
    发表或接收的论文第94页
基金资助项目第94-95页
附件第95页

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