符号说明 | 第8-9页 |
中文摘要 | 第9-10页 |
ABSTRACT | 第10页 |
第一章 绪论 | 第11-19页 |
1 血清淀粉样蛋白 A 在炎症反应中的研究现状 | 第11-14页 |
1.1 血清淀粉样蛋白 A 家族简介 | 第11-12页 |
1.2 血清淀粉样蛋白 A 的结构和功能 | 第12页 |
1.3 血清淀粉样蛋白 A 的合成与代谢 | 第12-13页 |
1.4 血清淀粉样蛋白 A 与炎性疾病 | 第13-14页 |
2 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的研究现状 | 第14-17页 |
2.1 组蛋白修饰与表观遗传学 | 第14-15页 |
2.2 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的催化活性 | 第15-16页 |
2.3 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 的生物学功能 | 第16-17页 |
3 选题意义和研究内容 | 第17-19页 |
3.1 选题意义 | 第17-18页 |
3.2 研究内容 | 第18-19页 |
第二章 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 表达的检测 | 第19-36页 |
1 材料和仪器 | 第19-22页 |
1.1 原料与试剂 | 第19-20页 |
1.2 仪器和设备 | 第20页 |
1.3 溶液配制 | 第20-21页 |
1.4 培养基 | 第21-22页 |
1.5 小鼠 | 第22页 |
1.6 细胞 | 第22页 |
2 实验方法 | 第22-26页 |
2.1 血清淀粉样蛋白 A 诱导巨噬细胞表观遗传学相关基因表达的芯片分析 | 第22页 |
2.2 RNA 的提取(TREIZOL 抽提法) | 第22-23页 |
2.3 将 RNA 反转录为 cDNA | 第23页 |
2.4 实时定量 PCR 技术(Real-time PCR) | 第23页 |
2.5 Westernblot 技术 | 第23-24页 |
2.6 从小鼠体内分离腹腔巨噬细胞 | 第24-25页 |
2.7 从小鼠体内分离骨髓巨噬细胞 | 第25页 |
2.8 siRNA 转染小鼠腹腔巨噬细胞 | 第25-26页 |
3 实验结果 | 第26-34页 |
3.1 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因的沉默效率 | 第26-27页 |
3.2 Real-time PCR 验证受 SAA 调控的表观遗传学基因 | 第27页 |
3.3 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的时间曲线 | 第27-29页 |
3.4 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的剂量曲线 | 第29-30页 |
3.5 血清淀粉样蛋白 A 诱导 Jmjd3 基因表达的受体研究 | 第30-34页 |
4 讨论 | 第34-35页 |
5 小结 | 第35-36页 |
第三章 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 对下游靶基因的调控作用 | 第36-62页 |
1 材料和仪器 | 第36-38页 |
1.1 原料与试剂 | 第36页 |
1.2 仪器和设备 | 第36-37页 |
1.3 溶液配制 | 第37页 |
1.4 小鼠 | 第37页 |
1.5 细胞 | 第37-38页 |
1.6 质粒 | 第38页 |
2 实验方法 | 第38-45页 |
2.1 脂质体转染 293 细胞 | 第38-39页 |
2.2 用于逆转录病毒感染的质粒构建 | 第39页 |
2.3 用于过表达 Jmjd3 蛋白及突变蛋白的质粒构建 | 第39-40页 |
2.4 利用大肠杆菌表达纯化血清淀粉样蛋白 A | 第40-41页 |
2.5 逆转录病毒的包装与浓缩 | 第41-42页 |
2.6 逆转录病毒感染小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 细胞 | 第42页 |
2.7 小鼠骨髓移植模型的构建 | 第42-43页 |
2.8 小鼠炎症模型的构建 | 第43页 |
2.9 流式细胞技术检测细胞因子的表达 | 第43-44页 |
2.10 小鼠眼眶静脉丛采血 | 第44页 |
2.11 小鼠血液中性粒细胞计数 | 第44-45页 |
3 实验结果 | 第45-59页 |
3.1 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因转录水平的沉默效率 | 第45-46页 |
3.2 小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因蛋白水平的沉默效率 | 第46页 |
3.3 小鼠巨噬细胞过表达 Jmjd3 蛋白及其突变蛋白 | 第46-47页 |
3.4 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 IL-23,IL-12 的诱导表达 | 第47-48页 |
3.5 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 G-CSF 的诱导表达 | 第48-49页 |
3.6 Jmjd3 基因沉默抑制了 SAA 对 TREM-1 的诱导表达 | 第49-50页 |
3.7 Jmjd3 基因过表达可诱导 G-CSF, IL-23, TREM-1 的合成 | 第50-51页 |
3.8 过表达 Jmjd3 突变蛋白抑制了 SAA 诱导 G-CSF, IL-23, TREM-1 的合成 | 第51-53页 |
3.9 小鼠体内实验验证 Jmjd3 在炎症模型中对 TREM-1, G-CSF, IL-23 的调控作用 | 第53-55页 |
3.10 小鼠 Jmjd3 基因调控 SAA 引起的粒细胞增多 | 第55-56页 |
3.11 小鼠 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的血细胞 G-CSF 上调 | 第56-57页 |
3.12 Jmjd3 可调控 SAA 诱导的一系列促炎因子的合成 | 第57-59页 |
4 讨论 | 第59-61页 |
4.1 病毒表达系统的选择 | 第59-60页 |
4.2 Jmjd3 蛋白 C 端(JmjC domain)的选取和突变位点的选择 | 第60页 |
4.3 流式细胞仪分析细胞内炎性因子的表达 | 第60-61页 |
5 小结 | 第61-62页 |
第四章 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 对下游靶基因的调控机制 | 第62-78页 |
1 材料和仪器 | 第62页 |
1.1 原料与试剂 | 第62页 |
1.2 仪器和设备 | 第62页 |
2 实验方法 | 第62-73页 |
2.1 小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 细胞的培养、传代和冻存 | 第62-65页 |
2.2 细胞和组织核蛋白的提取方法 | 第65-66页 |
2.3 染色质免疫共沉淀 | 第66-68页 |
2.4 免疫荧光技术 | 第68-69页 |
2.5 流式细胞仪分选细胞 | 第69-71页 |
2.6 质粒的转化、扩增和测序 | 第71-73页 |
3 实验结果 | 第73-76页 |
3.1 SAA 诱导 Jmjd3 蛋白的上调与组蛋白 H3K27me3 的表达下调 | 第73-74页 |
3.2 Jmjd3 调控细胞内组蛋白 H3K27me3 的表达水平 | 第74-75页 |
3.3 Jmjd3 调控靶基因启动子区 H3K27me3 的表达水平 | 第75-76页 |
4 讨论 | 第76-77页 |
5 小结 | 第77-78页 |
第五章 Jmjd3 基因在 SAA 诱导动脉粥样硬化中的调控 | 第78-86页 |
1 材料和仪器 | 第78页 |
1.1 原料与试剂 | 第78页 |
1.2 仪器和设备 | 第78页 |
2 实验方法 | 第78-81页 |
2.1 LDL 内吞进入巨噬细胞 | 第78-79页 |
2.2 巨噬细胞油红 O 染色 | 第79-80页 |
2.3 巨噬细胞泡沫化程度的检测指标 | 第80-81页 |
2.4 巨噬细胞泡沫化形成过程中促炎基因的表达检测 | 第81页 |
3 实验结果 | 第81-85页 |
3.1 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的巨噬细胞泡沫化形成 | 第81-84页 |
3.2 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导巨噬细胞泡沫化过程中炎性因子的合成 | 第84-85页 |
4 讨论 | 第85页 |
5 小结 | 第85-86页 |
第六章 总结与展望 | 第86-88页 |
1 总结 | 第86-87页 |
1.1 SAA 诱导小鼠巨噬细胞 Jmjd3 基因的合成 | 第86页 |
1.2 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导巨噬细胞促炎因子的合成 | 第86页 |
1.3 Jmjd3 基因调控组蛋白 H3K27me3 的甲基化水平 | 第86-87页 |
1.4 Jmjd3 基因调控 SAA 诱导的巨噬细胞泡沫化形成 | 第87页 |
2 展望 | 第87-88页 |
参考文献 | 第88-93页 |
致谢 | 第93-94页 |
攻读硕士期间主要研究成果 | 第94页 |
参加科研项目 | 第94页 |
发表或接收的论文 | 第94页 |
基金资助项目 | 第94-95页 |
附件 | 第95页 |