| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 肌内脂肪形成及影响因素 | 第13-18页 |
| 1.1 肌内脂肪与肉品质 | 第13页 |
| 1.2 影响猪肌内脂肪沉积的因素 | 第13-14页 |
| 1.2.1 品种及体重 | 第13页 |
| 1.2.2 营养物质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 基因 | 第14页 |
| 1.3 脂肪细胞的增殖 | 第14-15页 |
| 1.4 脂肪细胞的分化 | 第15-18页 |
| 1.4.1 PPARg | 第15-16页 |
| 1.4.2 C/EBP家族 | 第16-17页 |
| 1.4.3 其他转录因子 | 第17-18页 |
| 第二章 DNA甲基化与脂肪细胞 | 第18-22页 |
| 2.1 DNMT的研究进展 | 第18-20页 |
| 2.1.1 DNMT的结构 | 第18-19页 |
| 2.1.2 DNMT的功能 | 第19-20页 |
| 2.2 DNA甲基化与脂肪细胞分化、脂代谢 | 第20-22页 |
| 实验研究 | 第22-44页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| 第三章 DNA甲基化抑制剂对猪肌内脂肪细胞分化的影响 | 第23-30页 |
| 3.1 引言 | 第23页 |
| 3.2 材料与方法 | 第23-24页 |
| 3.2.1 组织样品的采集 | 第23页 |
| 3.2.2 猪肌内前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化 | 第23页 |
| 3.2.3 5 -Aza-DC处理细胞 | 第23页 |
| 3.2.4 BSP方法检测检测基因启动子的甲基化水平 | 第23-24页 |
| 3.2.5 RNA的提取,反转录和Real-timePCR | 第24页 |
| 3.2.6 油红O染色及异丙醇萃取 | 第24页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第24页 |
| 3.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 3.3.1 DNMT和PPARg在不同日龄猪的肌肉和脂肪中的表达 | 第24-25页 |
| 3.3.2 5 -Aza-DC抑制肌内脂肪细胞的分化 | 第25-26页 |
| 3.3.3 重亚硫酸盐处理后DNA的PCR扩增和T-A克隆 | 第26-27页 |
| 3.3.4 5 -Aza-DC抑制PPARg启动子的甲基化 | 第27-28页 |
| 3.4 讨论 | 第28-29页 |
| 3.5 小结 | 第29-30页 |
| 第四章 DNMT3A腺病毒过表达载体的构建与包装 | 第30-34页 |
| 4.1 引言 | 第30页 |
| 4.2 材料与方法 | 第30页 |
| 4.2.1 材料 | 第30页 |
| 4.2.2 腺病毒过表达载体的构建 | 第30页 |
| 4.2.3 腺病毒的包装、扩繁及滴度的测定 | 第30页 |
| 4.2.4 猪肌内前体脂肪细胞的分离培养 | 第30页 |
| 4.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 4.3.1 目的片段的扩增与腺病毒过表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 4.3.2 重组腺病毒的包装、扩繁、鉴定及滴度测定 | 第31页 |
| 4.3.3 Ad-NC和Ad-DNMT3A侵染猪肌內前体脂肪细胞 | 第31-32页 |
| 4.4 讨论 | 第32-33页 |
| 4.5 小结 | 第33-34页 |
| 第五章 DNMT3A对肌内脂肪细胞增殖的影响及机制 | 第34-39页 |
| 5.1 引言 | 第34页 |
| 5.2 材料与方法 | 第34页 |
| 5.2.1 猪肌内前体脂肪细胞的分离培养 | 第34页 |
| 5.2.2 RNA的提取,反转录和Real-timePCR | 第34页 |
| 5.2.3 蛋白提取及WB | 第34页 |
| 5.2.4 CCK8染色 | 第34页 |
| 5.2.5 EdU染色 | 第34页 |
| 5.2.6 流式细胞术分析 | 第34页 |
| 5.3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 5.3.1 DNMT3A促进DNA复制和细胞增殖 | 第34-36页 |
| 5.3.2 DNMT3A促进增殖基因的表达 | 第36-37页 |
| 5.3.3 DNMT3A提高p21启动子的甲基化 | 第37-38页 |
| 5.4 讨论 | 第38页 |
| 5.5 小结 | 第38-39页 |
| 第六章 DNMT3A对肌内脂肪细胞分化的作用及机制 | 第39-44页 |
| 6.1 引言 | 第39页 |
| 6.2 材料与方法 | 第39页 |
| 6.2.1 猪肌内前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化 | 第39页 |
| 6.2.2 腺病毒侵染 | 第39页 |
| 6.2.3 细胞样品的RNA提取、反转及实时定量检测 | 第39页 |
| 6.2.4 蛋白提取及WB | 第39页 |
| 6.2.5 BODIPY染色 | 第39页 |
| 6.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 6.3.1 DNMT3A抑制猪肌内脂肪细胞的分化 | 第39-41页 |
| 6.3.2 DNMT3A提高PPARg启动子的甲基化 | 第41-42页 |
| 6.3.3 罗格列酮缓解DNMT3A对猪肌内脂肪细胞分化的抑制 | 第42页 |
| 6.4 讨论 | 第42-43页 |
| 6.5 小结 | 第43-44页 |
| 结论、创新点及进一步研究内容 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 附录 | 第52-64页 |
| 表1 缩略词 | 第64-66页 |
| 表2 主要实验仪器及其生产商 | 第66-67页 |
| 表3 实验中使用的一抗 | 第67页 |
| 表4 实验中使用的二抗 | 第67-68页 |
| 表5 定量 PCR 的引物序列 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
