| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 莱姆病螺旋体研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 莱姆病螺旋体检测方法研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 直接检测 | 第14页 |
| 1.2.2 免疫学技术检测 | 第14-16页 |
| 1.2.3 分子生物技术检测 | 第16-17页 |
| 1.3 DHPLC 检测技术研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 DHPLC 原理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 DHPLC 特点 | 第18页 |
| 1.3.3 DHPLC 的应用 | 第18-20页 |
| 第2章 莱姆病螺旋体 PCR-DHPLC 检测方法的建立 | 第20-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第20-22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 试验菌株模板库的建立 | 第23-24页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.3 优化 PCR 通用扩增条件 | 第24页 |
| 2.2.4 DHPLC 分析条件 | 第24-25页 |
| 2.2.5 特异性试验 | 第25页 |
| 2.2.6 灵敏度试验 | 第25页 |
| 2.2.7 PCR-DHPLC 方法在实际中的应用 | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-36页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.3.2 PCR 反应结果 | 第27页 |
| 2.3.3 PCR-DHPLC 柱温参数优化 | 第27-31页 |
| 2.3.4 莱姆病螺旋体 PCR-DHPLC 检测特异性试验结果 | 第31页 |
| 2.3.5 莱姆病螺旋体 PCR-DHPLC 灵敏性检测试验结果 | 第31-32页 |
| 2.3.6 莱姆病螺旋体标准图谱的建立 | 第32-34页 |
| 2.3.7 PCR-DHPLC 对实际样品的检测结果 | 第34-36页 |
| 第3章 伯氏疏螺旋体外膜蛋白 A 的原核表达及纯化 | 第36-53页 |
| 3.1 试验材料 | 第36-39页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第37-39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-47页 |
| 3.2.1 莱姆病伯氏疏螺旋体外膜蛋白的选取 | 第39页 |
| 3.2.2 重组伯氏疏螺旋体 pET-28b-rOspA 表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2.2.1 OspA 片段的获得 | 第39页 |
| 3.2.2.2 OspA 与 pMD-18T 连接转化 | 第39页 |
| 3.2.2.3 酶切 pMD-18T-OspA 及表达载体 pET-28b | 第39-40页 |
| 3.2.2.4 OspA 与表达载体 pET-28b 的连接转化 | 第40-41页 |
| 3.2.2.5 pET-28b-rOspA 质粒抽提 | 第41页 |
| 3.2.3 原核表达载体 pET-28b-rOspA 的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.4 重组伯氏疏螺旋体 pET28b-rOspA 的原核表达 | 第42-44页 |
| 3.2.4.1 重组伯氏疏螺旋体 pET28b-rOspA 的转化 | 第42页 |
| 3.2.4.2 诱导条件的选择 | 第42-43页 |
| 3.2.4.4 重组 pET28b-rOspA 诱导表达及表达形式的确定 | 第43-44页 |
| 3.2.5 重组质粒 pET28b-OspA 的 Western Blotting 检测 | 第44-45页 |
| 3.2.5.1 菌体蛋白质制备 | 第44页 |
| 3.2.5.2 蛋白质的定量 | 第44页 |
| 3.2.5.3 SDS-PAGE 凝胶电泳及 PAGE 胶半干转印 | 第44-45页 |
| 3.2.5.4 Western Blotting 检测 | 第45页 |
| 3.2.6 重组质粒 pET28b-OspA 融合蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| 3.2.6.1 表达菌体的扩大培养 | 第45-46页 |
| 3.2.6.2 表达菌体的超声破碎及包涵体的溶解 | 第46页 |
| 3.2.6.3 镍柱亲和层析纯化包涵体 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 莱姆病伯氏疏螺旋体外膜蛋白的选取 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组克隆载体和表达载体的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 重组 pET-28b-rOspA 最佳表达条件的确定 | 第49-51页 |
| 3.3.4 重组 pET-28b-rOspA 表达形式的确定 | 第51页 |
| 3.3.5 重组质粒 pET-28b-rOspA 的 Western blotting 鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.6 重组质粒 pET-28b-rOspA 融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| 第4章 讨论 | 第53-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
