| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 CLA研究 | 第16-21页 |
| 1.1.1 CLA的结构与性质 | 第16页 |
| 1.1.2 CLA的来源 | 第16-17页 |
| 1.1.3 CLA的生理功能 | 第17-21页 |
| 1.2 CLA的合成方法与机制 | 第21-25页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第21-22页 |
| 1.2.2 生物合成法 | 第22-25页 |
| 1.3 亚油酸异构酶 | 第25-27页 |
| 1.3.1 亚油酸异构酶酶学性质 | 第25-26页 |
| 1.3.2 亚油酸异构酶基因 | 第26-27页 |
| 1.4 分析检测CLA的方法 | 第27-29页 |
| 1.4.1 紫外分光光度法（UV） | 第28页 |
| 1.4.2 气相色谱法（GC）与气质联用法（GC-MS） | 第28页 |
| 1.4.3 高效液相色谱法（HPLC） | 第28-29页 |
| 1.5 酶的体外定向进化 | 第29-32页 |
| 1.5.1 易错PCR技术（Error Prone PCR） | 第30-31页 |
| 1.5.2 DNA改组技术（DNA Shuffling） | 第31-32页 |
| 1.6 课题来源及主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第34-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-43页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.2 扩增引物 | 第35页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第36-37页 |
| 2.1.5 主要分子及生化试剂 | 第37-40页 |
| 2.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第40-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-57页 |
| 2.2.1 合成共轭亚油酸的微生物源亚油酸异构酶基因研究 | 第43-45页 |
| 2.2.2 两种亚油酸异构酶的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| 2.2.3 表达载体p Cold-lai-l和p Cold-lai-p的构建与表达 | 第46-48页 |
| 2.2.4 测定重组菌亚油酸异构酶酶活 | 第48-49页 |
| 2.2.5 产t10，c12-CLA的亚油酸异构酶的定向进化 | 第49-51页 |
| 2.2.6 产亚油酸异构酶的基因工程菌产酶条件优化 | 第51-53页 |
| 2.2.7 重组亚油酸异构酶分离纯化及酶学性质研究 | 第53-54页 |
| 2.2.8 突变后亚油酸异构酶基因在乳酸菌中表达 | 第54-56页 |
| 2.2.9 构建菌株发酵乳的研究 | 第56-57页 |
| 第3章 微生物源重要亚油酸异构酶基因及蛋白结构相关性研究 | 第57-74页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 菌株合成CLA类型的检测 | 第58-62页 |
| 3.2.1 紫外法 | 第58-60页 |
| 3.2.2 气相色谱法 | 第60-62页 |
| 3.3 lai基因的克隆和测序 | 第62-65页 |
| 3.3.1 基因组提取 | 第62页 |
| 3.3.2 亚油酸异构酶基因的克隆 | 第62-64页 |
| 3.3.3 两种亚油酸异构酶测序及比对 | 第64-65页 |
| 3.4 两种亚油酸异构酶基因的生物信息学分析 | 第65-72页 |
| 3.4.1 开放阅读框（ORF）分析 | 第65页 |
| 3.4.2 比对分析 | 第65-66页 |
| 3.4.3 一级结构分析 | 第66-68页 |
| 3.4.4 二级结构和功能分析 | 第68-70页 |
| 3.4.5 跨膜区分析 | 第70-71页 |
| 3.4.6 二级结构预测 | 第71-72页 |
| 3.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第4章 两种亚油酸异构酶表达及lai-p突变体库的构建 | 第74-90页 |
| 4.1 引言 | 第74-75页 |
| 4.2 两种亚油酸异构酶基因表达质粒的构建 | 第75-77页 |
| 4.3 两种亚油酸异构酶表达 | 第77-80页 |
| 4.4 lai-p突变及突变体库的构建 | 第80-89页 |
| 4.4.1 构建以gfp为标签的表达载体 | 第80-81页 |
| 4.4.2 利用易错PCR法构建突变体库 | 第81-82页 |
| 4.4.3 流式细胞仪筛选突变子 | 第82-89页 |
| 4.5 本章小结 | 第89-90页 |
| 第5章 基因工程菌产酶条件优化和亚油酸异构酶纯化及酶学性质研究 | 第90-109页 |
| 5.1 引言 | 第90-91页 |
| 5.2 单因素实验 | 第91-95页 |
| 5.2.1 发酵时间对重组菌产酶的影响 | 第91页 |
| 5.2.2 IPTG浓度对重组菌产酶的影响 | 第91-92页 |
| 5.2.3 装液量对重组菌产酶的影响 | 第92-93页 |
| 5.2.4 p H对重组菌产酶的影响 | 第93页 |
| 5.2.5 诱导前菌体生物量对重组菌产酶的影响 | 第93-94页 |
| 5.2.6 LA浓度对重组菌产酶的影响 | 第94页 |
| 5.2.7 离子浓度对重组菌产酶的影响 | 第94-95页 |
| 5.3 响应面法优化产酶条件 | 第95-101页 |
| 5.3.1 P-B设计 | 第95-97页 |
| 5.3.2 最陡爬坡实验 | 第97页 |
| 5.3.3 中心组合实验 | 第97-101页 |
| 5.4 重组亚油酸异构酶分离纯化 | 第101-104页 |
| 5.5 重组亚油酸异构酶酶学性质 | 第104-108页 |
| 5.5.1 重组亚油酸异构酶双倒数作图 | 第104页 |
| 5.5.2 温度对突变酶活力的影响及突变酶温度稳定范围 | 第104-105页 |
| 5.5.3 pH对突变酶活力的影响及突变酶pH稳定范围 | 第105-106页 |
| 5.5.4 底物浓度对突变酶活力的影响 | 第106-107页 |
| 5.5.5 金属离子对突变酶活力的影响 | 第107-108页 |
| 5.6 本章小结 | 第108-109页 |
| 第6章 突变亚油酸异构酶基因在S. thermophilus中表达及转化菌发酵乳性质的研 | 第109-121页 |
| 6.1 引言 | 第109-110页 |
| 6.2 影响电转化的因素 | 第110-114页 |
| 6.2.1 红霉素杀伤曲线 | 第110页 |
| 6.2.2 甘氨酸对S. thermophilus转化率的影响 | 第110-111页 |
| 6.2.3 菌体生长时期对电转化效率的影响 | 第111-112页 |
| 6.2.4 电压对电转化效率的影响 | 第112-113页 |
| 6.2.5 质粒浓度对电转化效率的影响 | 第113页 |
| 6.2.6 电转缓冲液对电转化效率的影响 | 第113-114页 |
| 6.3 突变亚油酸异构酶基因在S. thermophilus中表达 | 第114-115页 |
| 6.4 转化菌在发酵乳中的应用 | 第115-120页 |
| 6.4.1 发酵时间 | 第115页 |
| 6.4.2 发酵乳的质构 | 第115-116页 |
| 6.4.3 发酵乳粘度 | 第116-117页 |
| 6.4.4 发酵乳粒径 | 第117-118页 |
| 6.4.5 发酵乳中CLA含量 | 第118-120页 |
| 6.5 本章小结 | 第120-121页 |
| 结论 | 第121-124页 |
| 参考文献 | 第124-143页 |
| 附录一 | 第143-146页 |
| 附录二 | 第146-148页 |
| 附录三 | 第148-150页 |
| 附录四 | 第150-151页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第151-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| 个人简历 | 第154页 |
