| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 基因组编辑技术概况 | 第11-20页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶技术 | 第12-14页 |
| 1.1.2 转录激活因子类效应子核酸酶技术 | 第14-18页 |
| 1.1.3 由RNA介导的成簇规律性间隔的短回文重复系统 | 第18-20页 |
| 1.2 DNA双链断裂检测 | 第20-27页 |
| 1.2.1 γ-H2AX检测方法 | 第20-22页 |
| 1.2.2 荧光报告基因检测 | 第22页 |
| 1.2.3 GRATEN系统 | 第22-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27-32页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 扩增引物及实验工具酶 | 第27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要溶液配制 | 第29-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 利用氯化钙法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第32-33页 |
| 2.2.2 利用热激法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.3 利用电转法转化农杆菌感受态细胞 | 第34页 |
| 2.2.4 本氏烟草的种植 | 第34-35页 |
| 2.2.5 用渗透注射法对本氏烟草进行瞬时表达 | 第35-36页 |
| 2.3 GRATEN系统的构建 | 第36页 |
| 2.4 部分重复序列的GUS基因(GUUS)的构建 | 第36-37页 |
| 2.5 植物材料及转基因操作 | 第37页 |
| 2.6 GUS染色及观察 | 第37页 |
| 2.7 突变基因的筛选 | 第37-41页 |
| 2.7.1 本氏烟草的基因组DNA提取 | 第37-38页 |
| 2.7.2 获取突变基因 | 第38-39页 |
| 2.7.3 突变基因的检测与筛选 | 第39-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-50页 |
| 3.1 GRATEN系统的分析 | 第41-45页 |
| 3.1.1 GRATEN系统的构建 | 第41-43页 |
| 3.1.2 烟草叶片的瞬时表达 | 第43页 |
| 3.1.3 实验结果观察 | 第43-45页 |
| 3.2 突变基因的检测 | 第45-50页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第50-52页 |
| 4.1 讨论 | 第50-51页 |
| 4.2 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
