| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 肝损伤 | 第10-13页 |
| 1.1.1 化学性肝损伤 | 第10-11页 |
| 1.1.2 免疫性肝损伤 | 第11页 |
| 1.1.3 酒精性肝损伤 | 第11-12页 |
| 1.1.4 药物性肝损伤 | 第12-13页 |
| 1.2 内质网应激及其信号通路 | 第13-15页 |
| 1.2.1 内质网应激简介 | 第13页 |
| 1.2.2 内质网应激相关信号通路 | 第13-14页 |
| 1.2.3 内质网介导的凋亡信号通路 | 第14-15页 |
| 1.3 蚯蚓的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 蚯蚓简介 | 第15页 |
| 1.3.2 蚯蚓的药理作用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 蚯蚓对肝脏的保护作用 | 第16-17页 |
| 1.4 RNA-seq简介 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 引言 | 第18-19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第19页 |
| 2.2.2 菌株 | 第19页 |
| 2.2.3 试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.4 药品 | 第20页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.6 试剂配制 | 第21-23页 |
| 2.2.7 蚯蚓活性组分的提取步骤 | 第23页 |
| 2.3 蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的干预作用 | 第23-28页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.3.2 衣霉素诱导L-02细胞ERS模型的建立 | 第24-25页 |
| 2.3.3 CCK-8法检测EWPs处理后L-02细胞活力 | 第25页 |
| 2.3.4 流式细胞仪检测L-02细胞的凋亡情况 | 第25页 |
| 2.3.5 qPCR检测ERS相关因子mRNA的表达情况 | 第25-26页 |
| 2.3.6 Westernblot检测ERS相关因子蛋白的表达情况 | 第26-28页 |
| 2.4 靶向人CHOP基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4.1 shRNA目标序列的设计与合成 | 第28页 |
| 2.4.2 shRNA真核表达载体的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4.3 荧光蛋白在shRNA真核表达载体转染L-02细胞后的表达 | 第29页 |
| 2.4.4 Westernblot检测CHOP蛋白的表达 | 第29页 |
| 2.5 RNA-seq高通量测序 | 第29-33页 |
| 2.5.1 RNA样品的制备与检测 | 第29-30页 |
| 2.5.2 测序文库的构建 | 第30页 |
| 2.5.3 数据过滤和质量评估 | 第30-31页 |
| 2.5.4 数据比对分析 | 第31页 |
| 2.5.5 基因定量分析 | 第31页 |
| 2.5.6 差异表达基因的筛选 | 第31页 |
| 2.5.7 差异表达基因的GO富集分析 | 第31-32页 |
| 2.5.8 差异表达基因的Pathway分析 | 第32页 |
| 2.5.9 部分差异基因qPCR验证 | 第32-33页 |
| 2.6 统计学处理 | 第33-34页 |
| 第3章 结果 | 第34-52页 |
| 3.1 蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞损伤的干预作用研究结果 | 第34-38页 |
| 3.1.1 蚯蚓活性组分的提取分析结果 | 第34页 |
| 3.1.2 衣霉素诱导L-02细胞ERS模型的建立 | 第34页 |
| 3.1.3 EWPs对L-02细胞存活率的影响 | 第34-35页 |
| 3.1.4 EWPs对L-02细胞凋亡的影响 | 第35-36页 |
| 3.1.5 EWPs对L-02细胞中ERS相关因子mRNA表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.1.6 EWPs对L-02细胞中ERS相关因子蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.2 靶向人CHOP基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定结果 | 第38-41页 |
| 3.2.1 shRNA真核表达载体的构建和鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.2.2 Cy3在转染后L-02细胞中的表达情况 | 第39-40页 |
| 3.2.3 Westernblot检测CHOP蛋白的表达结果 | 第40-41页 |
| 3.3 RNA-seq高通量测序结果与分析 | 第41-52页 |
| 3.3.1 总RNA样品的提取与检测 | 第41页 |
| 3.3.2 文库数据质量评估情况 | 第41-43页 |
| 3.3.3 参考基因组比对分析 | 第43-44页 |
| 3.3.4 基因水平的定量结果 | 第44页 |
| 3.3.5 差异表达基因分析 | 第44-46页 |
| 3.3.6 差异基因GO功能分析 | 第46-48页 |
| 3.3.7 差异基因KEGGpathway的富集分析 | 第48-50页 |
| 3.3.8 部分差异基因qPCR验证结果 | 第50-52页 |
| 第4章 讨论 | 第52-58页 |
| 4.1 蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的保护作用 | 第52-53页 |
| 4.2 靶向人CHOP基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3 RNA-seq高通量测序 | 第54-57页 |
| 4.4 问题和展望 | 第57-58页 |
| 第5章 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 缩略语词汇表 | 第70-72页 |
| 附录 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第82-83页 |
