| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 鱼类性腺发育 | 第14-25页 |
| 1.1.1 鱼类原始生殖细胞的迁移 | 第14-15页 |
| 1.1.2 鱼类性腺分化 | 第15-16页 |
| 1.1.2.1 鱼类性腺分化的类型 | 第15页 |
| 1.1.2.2 鱼类性腺分化的标志 | 第15-16页 |
| 1.1.3 鱼类配子发生 | 第16-25页 |
| 1.1.3.1 卵细胞分期及形态特征 | 第17-21页 |
| 1.1.3.2 精细胞分期及形态特征 | 第21-25页 |
| 1.2 鱼类性别分化机制 | 第25-33页 |
| 1.2.1 鱼类性别决定 | 第25-27页 |
| 1.2.1.1 基因型性别决定 | 第25-26页 |
| 1.2.1.2 环境型性别决定 | 第26-27页 |
| 1.2.2 生殖细胞在鱼类性分化中的作用 | 第27-29页 |
| 1.2.3 体细胞调控生殖细胞的分化 | 第29-33页 |
| 1.3 牙鲆性别分化研究进展 | 第33页 |
| 1.4 本研究的意义及目的 | 第33-35页 |
| 第二章 牙鲆生殖细胞迁移,增殖及分化规律的研究 | 第35-75页 |
| 2.1 前言 | 第35-36页 |
| 2.2 雌性生殖细胞迁移,增殖及卵子生成的规律 | 第36-59页 |
| 2.2.1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.2.1.2 主要试剂和仪器 | 第37-38页 |
| 2.2.1.3 组织学观察 | 第38页 |
| 2.2.1.4 荧光定量 | 第38-39页 |
| 2.2.1.5 foxl2原位杂交分析 | 第39-41页 |
| 2.2.1.6 数据分析 | 第41页 |
| 2.2.2 结果 | 第41-57页 |
| 2.2.2.1 PGCs胚后迁移 | 第41-45页 |
| 2.2.2.2 原始性腺 | 第45-46页 |
| 2.2.2.3 未分化性腺 | 第46页 |
| 2.2.2.4 卵巢分化 | 第46-48页 |
| 2.2.2.5 卵巢腔形成 | 第48-49页 |
| 2.2.2.6 产卵板和生殖上皮形成 | 第49-57页 |
| 2.2.3 讨论 | 第57-59页 |
| 2.2.3.1 PGCs的迁移和未分化的性腺 | 第57页 |
| 2.2.3.2 性腺分化开始 | 第57-58页 |
| 2.2.3.3 卵巢分化 | 第58-59页 |
| 2.3 雄性生殖细胞迁移,增殖及精子生成的规律 | 第59-75页 |
| 2.3.1 材料与方法 | 第59-60页 |
| 2.3.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 2.3.1.2 主要试剂和仪器 | 第59-60页 |
| 2.3.1.3 性腺组织学 | 第60页 |
| 2.3.1.4 生殖细胞数量及细胞大小 | 第60页 |
| 2.3.1.5 免疫组化 | 第60页 |
| 2.3.1.6 数据分析 | 第60页 |
| 2.3.2 实验结果 | 第60-72页 |
| 2.3.2.1 未分化性腺 | 第60-64页 |
| 2.3.2.2 精巢发育 | 第64-65页 |
| 2.3.2.2.1 输精管形成 | 第64页 |
| 2.3.2.2.2 精小叶形成 | 第64-65页 |
| 2.3.2.3 精子生成 | 第65-69页 |
| 2.3.2.3.1 生殖细胞细胞核形态学 | 第66-69页 |
| 2.3.2.4 Nanos2显示GSC分布 | 第69-72页 |
| 2.3.3 讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 牙鲆生殖细胞增殖与分化方向关联分析 | 第75-85页 |
| 3.1 前言 | 第75页 |
| 3.2 材料和方法 | 第75-77页 |
| 3.2.1 实验材料和取样 | 第75-76页 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 | 第76页 |
| 3.2.3 石蜡组织切片 | 第76页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第76-77页 |
| 3.3 结果 | 第77-82页 |
| 3.3.1 四组牙鲆雌雄群体全长比较分析 | 第77页 |
| 3.3.2 四组牙鲆雌雄群体性腺发育组织学研究 | 第77-80页 |
| 3.3.3 性分化关键时期,四组牙鲆雌雄群体生殖细胞数量分析 | 第80-81页 |
| 3.3.4 性分化关键时期,四组牙鲆雌雄群体vasa表达量分析 | 第81-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-85页 |
| 3.4.1 外源激素抑制牙鲆的生长 | 第82页 |
| 3.4.2 外源激素和高温改变牙鲆性腺发育 | 第82-83页 |
| 3.4.3 牙鲆雌雄群体生殖细胞呈二态性增殖 | 第83-85页 |
| 第四章 gsdf/amh/p450arom在牙鲆性分化过程中的表达研究 | 第85-96页 |
| 4.1 前言 | 第85-86页 |
| 4.2 材料和方法 | 第86-89页 |
| 4.2.1 实验材料和取样 | 第86页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 | 第86页 |
| 4.2.3 牙鲆gsdf基因全长克隆 | 第86-87页 |
| 4.2.4 基因序列分析及进化树构建 | 第87页 |
| 4.2.5 半定量RT-PCR组织特异性分析 | 第87-88页 |
| 4.2.7 gsdf原位杂交分析 | 第88页 |
| 4.2.7.1 gsdfRNA探针合成 | 第88页 |
| 4.2.7.2 gsdf原位杂交 | 第88页 |
| 4.2.8 四组牙鲆雌雄群体gsdf/amh/p450arom荧光定量分析 | 第88-89页 |
| 4.3 结果 | 第89-94页 |
| 4.3.1 牙鲆gsdf基因克隆及序列分析 | 第89-91页 |
| 4.3.2 牙鲆gsdf基因在成体组织定量表达分析 | 第91页 |
| 4.3.3 牙鲆gsdf基因在雌雄性腺中定位表达分析 | 第91-92页 |
| 4.3.4 性分化时期,四组牙鲆雌雄群体gsdf/amh/p450arom差异表达分析 | 第92-94页 |
| 4.4 讨论 | 第94-96页 |
| 4.4.1 牙鲆gsdf序列高度保守 | 第94-95页 |
| 4.4.2 牙鲆gsdf特异于生殖细胞周围体细胞中表达 | 第95页 |
| 4.4.3 牙鲆gsdf/amh/p450arom可能参与调节生殖细胞增殖 | 第95-96页 |
| 第五章 gsdf在牙鲆雌雄性腺发育过程中的表达和功能研究 | 第96-109页 |
| 5.1 前言 | 第96-97页 |
| 5.2 材料与方法 | 第97-98页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第97页 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器 | 第97页 |
| 5.2.3 性腺组织学 | 第97页 |
| 5.2.4 RT-PCR定量 | 第97页 |
| 5.2.5 原位杂交 | 第97-98页 |
| 5.2.6 免疫组化 | 第98页 |
| 5.2.7 gsdf基因的过表达及敲降 | 第98页 |
| 5.2.8 数据分析 | 第98页 |
| 5.3 实验结果 | 第98-105页 |
| 5.3.1 雌雄群体中gsdfmRNA表达量 | 第98-99页 |
| 5.3.2 性腺中gsdfmRNA和蛋白的定位 | 第99-104页 |
| 5.3.2.1 未分化性腺 | 第99-100页 |
| 5.3.2.2 分化的精巢和卵巢 | 第100-102页 |
| 5.3.2.3 成熟的精巢和卵巢 | 第102-104页 |
| 5.3.3 gsdf的过表达和敲降 | 第104-105页 |
| 5.4 讨论 | 第105-109页 |
| 第六章 ly75在牙鲆雌雄性腺的表达模式研究 | 第109-119页 |
| 6.1 前言 | 第109页 |
| 6.2 材料与方法 | 第109-113页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第109-110页 |
| 6.2.2 主要试剂和仪器 | 第110页 |
| 6.2.3 牙鲆ly75基因全长克隆 | 第110-111页 |
| 6.2.4 基因序列分析及进化树构建 | 第111页 |
| 6.2.5 半定量RT-PCR组织特异性分析 | 第111-112页 |
| 6.2.6 ly75原位杂交分析 | 第112-113页 |
| 6.2.6.1 ly75RNA探针合成 | 第112-113页 |
| 6.2.6.2 ly75原位杂交 | 第113页 |
| 6.2.7 Nanos2免疫组化 | 第113页 |
| 6.3 实验结果 | 第113-117页 |
| 6.3.1 牙鲆ly75基因克隆及序列分析 | 第113-115页 |
| 6.3.2 牙鲆ly75基因组织特异性表达分析 | 第115-116页 |
| 6.3.3 牙鲆ly75基因在性腺中定位分析 | 第116-117页 |
| 6.4 讨论 | 第117-119页 |
| 第七章 结论与展望 | 第119-121页 |
| 7.1 研究结论 | 第119页 |
| 7.2 展望 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 作者简历 | 第137-138页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第138-139页 |
