| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 结肠癌 | 第12-14页 |
| 1.1.1 结肠癌的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 结肠癌的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 结肠癌的表现 | 第13-14页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第14-20页 |
| 1.2.1 细胞凋亡的概念 | 第14页 |
| 1.2.2 调亡与坏死的区别 | 第14-15页 |
| 1.2.3 细胞凋亡的主要特征 | 第15页 |
| 1.2.4 细胞凋亡的信号转导 | 第15-16页 |
| 1.2.5 细胞凋亡的相关基因 | 第16-19页 |
| 1.2.6 细胞凋亡的检测 | 第19-20页 |
| 1.3 大蒜素治疗肿瘤的作用机制 | 第20-24页 |
| 1.3.1 提高细胞免疫功能 | 第21页 |
| 1.3.2 抗氧、抗自由基作用 | 第21页 |
| 1.3.3 诱导肿瘤细胞凋亡 | 第21-22页 |
| 1.3.4 直接杀死肿瘤细胞 | 第22页 |
| 1.3.5 对肿瘤细胞周期的影响 | 第22-23页 |
| 1.3.6 对端粒酶的影响 | 第23页 |
| 1.3.7 对癌基因蛋白表达的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.8 对肿瘤药物的增敏作用 | 第24页 |
| 1.4 本文实验的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第25-30页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要药品 | 第26页 |
| 2.1.3 载体通用引物 | 第26-27页 |
| 2.1.4 细胞株 | 第27页 |
| 2.1.5 主要溶液配制 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第31页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第31页 |
| 2.2.4 细胞复苏 | 第31页 |
| 2.2.5 细胞收集 | 第31页 |
| 2.2.6 细胞洗涤 | 第31-32页 |
| 2.2.7 细胞计数 | 第32页 |
| 2.2.8 细胞生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.2.9 细胞生长抑制曲线和 IC50值的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.10 光学显微镜下观察细胞形态的变化 | 第33页 |
| 2.2.11 荧光显微镜下观察细胞核的变化 | 第33页 |
| 2.2.12 透射电镜观察细胞形态的变化 | 第33页 |
| 2.2.13 细胞生化特征的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.14 线粒体跨膜电位的检测 | 第34页 |
| 2.2.15 流式细胞术检测细胞周期的变化 | 第34-35页 |
| 2.2.16 流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第35页 |
| 2.2.17 RNA 的提取过程 | 第35-36页 |
| 2.2.18 RT 反应 | 第36页 |
| 2.2.19 Real time PCR 反应 | 第36-37页 |
| 2.2.20 胞质蛋白抽提 | 第37页 |
| 2.2.21 膜蛋白抽提 | 第37-38页 |
| 2.2.22 蛋白质变性 | 第38-39页 |
| 2.2.23 SDS-PAGE 电泳 | 第39-40页 |
| 2.2.24 转膜 | 第40页 |
| 2.2.25 Western 杂交 | 第40-41页 |
| 2.2.26 统计学处理 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-68页 |
| 3.1 细胞生长曲线 | 第42页 |
| 3.2 细胞的生长抑制曲线 | 第42-44页 |
| 3.3 大蒜素的 IC50值 | 第44页 |
| 3.4 普通光镜下的细胞形态 | 第44-47页 |
| 3.4.1 未经药物处理的人结肠癌细胞株 LS-174-T 的细胞形态 | 第44-45页 |
| 3.4.2 不同浓度大蒜素作用人结肠癌细胞株 LS-174-T 的细胞形态 | 第45-47页 |
| 3.5 荧光显微镜下正常及加药的细胞形态 | 第47-51页 |
| 3.5.1 未经药物处理的人结肠癌细胞株 LS-174-T 的细胞形态 | 第47-48页 |
| 3.5.2 不同浓度大蒜素作用下人结肠癌细胞株 LS-174-T 的细胞形态 | 第48-51页 |
| 3.6 透射电镜下细胞的形态 | 第51-54页 |
| 3.7 LS-174-T 细胞的生化特征 | 第54页 |
| 3.8 线粒体跨膜电位检测 | 第54-56页 |
| 3.9 流式细胞术观察细胞周期的变化 | 第56-57页 |
| 3.10 Annexin VFITC／PI 双标记流式细胞术检测 LS-174-T 细胞凋亡 | 第57-62页 |
| 3.11 大蒜素对 LS-174-T 细胞 bax/bcl-2mRNA 的表达水平的影响 | 第62-66页 |
| 3.12 大蒜素对 LS-174-T 细胞 Bax/bcl-2 蛋白表达水平的影响 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 4.1 大蒜素素诱导细胞凋亡的形态学观察 | 第68-69页 |
| 4.2 流式细胞术检测细胞的周期分布及线粒体膜电位的变化 | 第69页 |
| 4.3 荧光定量 PCR 检测 bax/bcl-2mRNA 的变化 | 第69-70页 |
| 4.4 Western blot 检测 bax/bcl-2 蛋白表达的变化 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 附录 细胞凋亡百分率数据表 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
