缩略语表 | 第6-10页 |
中文摘要 | 第10-14页 |
ABSTRACT | 第14-18页 |
前言 | 第19-20页 |
文献回顾 | 第20-40页 |
一、肿瘤侵袭和和转移的机机制 | 第20-23页 |
二、Coronin 家族蛋白参与并调节肌动蛋白依赖的多种生物学进程。 | 第23-40页 |
第一部分:CORONIN 3 在胃癌细胞系和组织的表达 | 第40-53页 |
前言 | 第40页 |
1.材料和仪器 | 第40-43页 |
1.1 细胞株和组织标本 | 第40-41页 |
1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
2. 方法 | 第43-48页 |
2.1 细胞培养: | 第43页 |
2.2 免疫组织化学 | 第43-44页 |
2.3 Western blot | 第44-45页 |
2.4 qPCR 实验检测 mRNA 表达 | 第45-47页 |
2.5 激光共聚焦检测 Coronin 3 在细胞中的定位 | 第47-48页 |
3. 结果 | 第48-51页 |
3.1 Coronin 3 在胃癌组织中的表达 | 第48-49页 |
3.2 CCoronin 3 在在胃癌细胞胞系中的表达达 | 第49-50页 |
3.3 Coronin 3 在胃癌细胞中的亚细胞定位 | 第50-51页 |
4.讨论 | 第51-53页 |
第二部分:CORONIN 3 在胃癌恶性生物学行为中的作用 | 第53-75页 |
前言 | 第53页 |
1.材料和仪器 | 第53-55页 |
1.1 细胞株详见第一部分 1.1 | 第53页 |
1.2 质粒(图 1) | 第53-54页 |
1.3 慢病毒载体(图 2) | 第54页 |
1.4 主要试剂 | 第54-55页 |
1.5 主要仪器 | 第55页 |
2.方法 | 第55-62页 |
2.1 shRNA 慢病毒载体构建 | 第55-56页 |
2.2 细胞的基因转导 | 第56-58页 |
2.3 Western Blot 鉴定 | 第58页 |
2.4 qPCR 实验验证 | 第58-59页 |
2.5 转移与侵袭实验 | 第59-60页 |
2.6 细胞凋亡实验 | 第60页 |
2.7 细胞周期实验 | 第60-61页 |
2.8 细胞增殖能力的检测-MTT 实验 | 第61-62页 |
2.9 细胞平板集落形成实验 | 第62页 |
2.10 统计学分析 | 第62页 |
3.结果 | 第62-73页 |
3.1 Coronin 3-shRNA 干扰载体的构建及鉴定 | 第62-63页 |
3.2 Coronin 3 特异性 shRNA 明显抑制胃癌细胞中 Coronin 3 的表达 | 第63-64页 |
3.3 下调 Coronin 3 表达可抑制胃癌细胞的侵袭、迁移和体内转移能力 | 第64-67页 |
3.4 Coronin 3 对胃癌细胞系 SGC7901 和 MKN45 的细胞凋亡的影响 | 第67-68页 |
3.5 Coronin 3 对胃癌细胞系 SGC7901 和 MKN45 的细胞周期的影响 | 第68-69页 |
3.6 Coronin 3 对胃癌细胞系 SGC7901 和 MKN45 的细胞增殖的影响 | 第69-70页 |
3.7 Coronin 3 对胃癌细胞系 SGC7901 和 MKN45 的细胞克隆形成率的影响 | 第70-71页 |
3.8 Coronin 3 促进胃癌细胞侵袭与转移作用的验证 | 第71-73页 |
4.讨论 | 第73-75页 |
第三部分:CORONIN3 调节胃癌转移的分子机制研究 | 第75-82页 |
前言 | 第75页 |
1.材料 | 第75-76页 |
1.1 主要试剂和材料 | 第75页 |
1.2 主要仪器 | 第75-76页 |
2.方法 | 第76页 |
2.1 Western Blot | 第76页 |
2.2 qPCR 步骤见第一部分 | 第76页 |
2.3 转移表达谱芯片 | 第76页 |
3.结果 | 第76-80页 |
3.1 在胃癌细胞中干扰 Coronin 3,与转移密切相关的 MMP-9、TIMP3、SMAD4 等基因表达改变 | 第76-78页 |
3.2 MKN45NC 和 MKN45-Coronin 3-shRNA 中与转移相关差异基因的验证 | 第78-80页 |
4.讨论 | 第80-82页 |
小结 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-93页 |
附录 | 第93-94页 |
个人简历和研究成果 | 第94-95页 |
致谢 | 第95-96页 |