| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第11-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-42页 |
| 1.1 呼吸作用 | 第17-22页 |
| 1.1.1 呼吸作用概述 | 第17页 |
| 1.1.2 糖酵解 | 第17-20页 |
| 1.1.3 无氧呼吸 | 第20-22页 |
| 1.2 乳酸代谢 | 第22-28页 |
| 1.2.1 乳酸的结构和性质 | 第22-23页 |
| 1.2.2 乳酸的生成 | 第23-25页 |
| 1.2.3 乳酸的消除 | 第25页 |
| 1.2.4 乳酸脱氢酶 | 第25-28页 |
| 1.3 乳酸对细胞的作用 | 第28-32页 |
| 1.3.1 细胞酸化 | 第28-29页 |
| 1.3.2 乳酸在癌症发生中的调节作用 | 第29-32页 |
| 1.4 丙酮醛代谢和乙二醛酶系统 | 第32-36页 |
| 1.4.1 丙酮醛代谢 | 第32-33页 |
| 1.4.2 乙二醛酶系统 | 第33-36页 |
| 1.5 可变剪接 | 第36-41页 |
| 1.5.1 可变剪接概述 | 第36-37页 |
| 1.5.2 植物中的可变剪接 | 第37-38页 |
| 1.5.3 植物中可变剪接类型 | 第38-39页 |
| 1.5.4 植物可变剪接的生物学功能 | 第39-41页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第41-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-57页 |
| 2.1 水稻材料及培养处理 | 第42-43页 |
| 2.1.1 水稻材料及种植 | 第42页 |
| 2.1.2 水稻材料培养处理与取材 | 第42-43页 |
| 2.2 DNA提取 | 第43-44页 |
| 2.3 RNA提取、mRNA第一链合成及半定量和定量PCR | 第44-47页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.3.2 cDNA第一链合成 | 第45页 |
| 2.3.3 半定量PCR | 第45-46页 |
| 2.3.4 定量PCR | 第46-47页 |
| 2.4 蛋白提取及Western Blot | 第47-48页 |
| 2.4.1 蛋白提取 | 第47页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE电泳及Western Blot | 第47-48页 |
| 2.5 原核表达、蛋白纯化及酶活测定 | 第48-51页 |
| 2.5.1 菌株和载体 | 第48页 |
| 2.5.2 融合蛋白的载体构建及原核诱导表达 | 第48-49页 |
| 2.5.3 GST融合蛋白纯化 | 第49页 |
| 2.5.4 GST融合蛋白柱上剪切GST标签 | 第49页 |
| 2.5.5 His融合蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 2.5.6 OsD-LDH活性测定 | 第50页 |
| 2.5.7 OsD-LDH细菌突变体互补实验 | 第50-51页 |
| 2.6 亚细胞定位 | 第51-52页 |
| 2.6.1 载体构建 | 第51页 |
| 2.6.2 原生质体制备及转化 | 第51-52页 |
| 2.7 OsD-LDH Promoter：：GUS融合载体构建及组织化学染色 | 第52-53页 |
| 2.7.1 OsD-LDH promoter：：GUS融合载体构建 | 第52页 |
| 2.7.2 GUS染色 | 第52-53页 |
| 2.8 MG含量测定 | 第53页 |
| 2.9 总谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽含量测定 | 第53-55页 |
| 2.10 乙二醛酶系统(Glyoxalase system)活性检测 | 第55-57页 |
| 第三章 结果与分析 | 第57-102页 |
| 3.1 OsD-LDH基因克隆 | 第57-67页 |
| 3.1.1 OsD-LDH生物信息学分析 | 第57页 |
| 3.1.2 OsD-LDH克隆及可变剪接分析 | 第57-59页 |
| 3.1.3 OsD-LDH-1与OsD-LDH-2比较 | 第59-61页 |
| 3.1.4 OsD-LDH-2同源比对 | 第61-64页 |
| 3.1.5 OsD-LDH系统进化分析 | 第64-67页 |
| 3.2 OsD-LDH蛋白纯化和酶学活性分析 | 第67-78页 |
| 3.2.1 OsD-LDH蛋白纯化及Western Blot鉴定 | 第67-69页 |
| 3.2.2 OsD-LDH-1与OsD-LDH-2活性差异分析 | 第69-70页 |
| 3.2.3 OsD-LDH-2电子受体分析 | 第70-71页 |
| 3.2.4 OsD-LDH-2最适pH分析 | 第71-72页 |
| 3.2.5 OsD-LDH-2最适反应温度分析 | 第72-73页 |
| 3.2.6 OsD-LDH-2底物特异性分析 | 第73-75页 |
| 3.2.7 OsD-LDH-2动力学参数 | 第75-77页 |
| 3.2.8 OsD-LDH-2温度敏感性分析 | 第77-78页 |
| 3.3 OsD-LDH亚细胞定位分析 | 第78-81页 |
| 3.3.1 OsD-LDH细胞内定位预测 | 第78页 |
| 3.3.2 OsD-LDH亚细胞定位重组载体构建 | 第78-79页 |
| 3.3.3 OsD-LDH亚细胞定位 | 第79-81页 |
| 3.4 OsD-LDH组织表达模式分析及对非生物胁迫的响应 | 第81-91页 |
| 3.4.1 Real-Time PCR鉴定OsD-LDH组织表达模式分析 | 第81-83页 |
| 3.4.2 通过OsD-LDH Promter：：GUS转基因株系鉴定OsD-LDH表达模式 | 第83页 |
| 3.4.3 OsD-LDH对逆境胁迫的响应 | 第83-84页 |
| 3.4.4 OsD-LDH对激素刺激的响应 | 第84-86页 |
| 3.4.5 OsD-LDH对D-乳酸和L-乳酸处理的表达变化 | 第86-87页 |
| 3.4.6 OsD-LDH在无氧呼吸条件下的表达变化 | 第87-89页 |
| 3.4.7 OsD-LDH在糖处理条件下的表达变化 | 第89-91页 |
| 3.5 OsD-LDH RNAi转基因株系鉴定及功能分析 | 第91-102页 |
| 3.5.1 OsD-LDH RNAi转基因载体构建及转基因植株PCR鉴定 | 第91页 |
| 3.5.2 OsD-LDH RNAi转基因株系基因表达鉴定 | 第91-93页 |
| 3.5.3 丙酮醛处理OsD-LDH RNAi转基因株系 | 第93-96页 |
| 3.5.4 苗期MG含量及GSH含量分析 | 第96-99页 |
| 3.5.5 MG处理对乙二醛酶系统活性的影响 | 第99-100页 |
| 3.5.6 NaCl处理OsD-LDH RNAi转基因株系 | 第100-102页 |
| 第四章 讨论 | 第102-108页 |
| 4.1 OsD-LDH编码一个CytC依赖的D-乳酸脱氢酶 | 第102-103页 |
| 4.2 OsD-LDH是一种高效的D-乳酸脱氢酶 | 第103-104页 |
| 4.3 OsD-LDH不参与光呼吸途径 | 第104-105页 |
| 4.4 OsD-LDH也不参与厌氧代谢途径 | 第105页 |
| 4.5 OsD-LDH参与丙酮醛代谢途径 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-130页 |
| 附录Ⅰ 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第130-133页 |
| 附录Ⅱ 引物表 | 第133-135页 |
| 博士期间已发表和待发表的学术论文和会议摘要 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
