| 目录 | 第6-10页 |
| 致谢 | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-24页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 包含SPX结构域蛋白的功能研究 | 第16-22页 |
| 1.2.1 酵母缺磷胁迫信号通路(PHO)中心调控蛋白ScPho81 | 第16-17页 |
| 1.2.2 酵母低亲和磷转运体ScPho87和ScPho90 | 第17-18页 |
| 1.2.3 植物磷信号和磷平衡负调控蛋白SPXs | 第18-19页 |
| 1.2.4 植物磷从根往地上部转运关键蛋白AtPHO1/OsPHO1；2 | 第19-20页 |
| 1.2.5 植物光形态发生和种子胚乳发育调控因子AtSHB1 | 第20-21页 |
| 1.2.6 植物叶片磷转运相关蛋白OsSPX-MFSs | 第21页 |
| 1.2.7 植物氮磷协同调控蛋白AtNLA | 第21-22页 |
| 1.3 植物磷信号和磷平衡中心调控转录因子 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究目标与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 PHR2调控SPX1和SPX2缺磷诱导表达 | 第24-31页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 水稻材料及培养方法 | 第24页 |
| 2.2.2 水稻总RNA抽提及定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第24页 |
| 2.2.3 PHR2p-PHR2-FLAG融合载体构建 | 第24-25页 |
| 2.2.4 染色体免疫共沉淀实验(ChIP) | 第25页 |
| 2.2.5 蛋白原核表达和凝胶迁移实验(EMSA) | 第25-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-29页 |
| 2.3.1 PHR2调控SPX1和SPX2缺磷诱导表达 | 第26页 |
| 2.3.2 PHR2直接结合SPX1和SPX2启动子 | 第26-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 SPX1和SPX2在磷信号和磷平衡中的功能互补研究 | 第31-45页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 水稻材料及培养方法 | 第31页 |
| 3.2.2 spx1和spx2突变体鉴定及发展spx1/spx2双突变体材料 | 第31页 |
| 3.2.3 SPX1和SPX2基因组回复载体构建和突变体转基因回复 | 第31-32页 |
| 3.2.4 水稻有效磷及生理参数测定 | 第32页 |
| 3.2.5 水稻~(33)P吸收实验 | 第32页 |
| 3.2.6 水稻总RNA提取及表达分析 | 第32页 |
| 3.2.7 SPX2超表达载体构建及转基因植株Southern印迹拷贝数鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 结果 | 第33-43页 |
| 3.3.1 spx1和spx2突变体鉴定及基因组回复 | 第33-35页 |
| 3.3.2 spx1、spx2和spx1/spx2表型与磷分析 | 第35页 |
| 3.3.3 spx1、spx2和spx1/spx2突变体里PHR2下游缺磷响应基因表达分析 | 第35-40页 |
| 3.3.4 SPX2超表达材料鉴定和水培生理表型 | 第40-42页 |
| 3.3.5 SPX1和SPX2超表达材料里PHR2下游缺磷响应基因表达分析 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 SPX1和SPX2基因与蛋白组织表达分析及亚细胞定位 | 第45-52页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 材料与方法 | 第45-47页 |
| 4.2.1 水稻材料及培养方法 | 第45页 |
| 4.2.2 原位杂交 | 第45-46页 |
| 4.2.3 SPX1-GUS和SPX2-GUS融合基因转基因材料发展 | 第46页 |
| 4.2.4 GUS染色与切片观察 | 第46页 |
| 4.2.5 水稻愈伤原生质体瞬时转化观察蛋白亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 4.3 结果 | 第47-49页 |
| 4.3.1 SPX1和SPX2基因和蛋白组织表达分析 | 第47-49页 |
| 4.3.2 SPX1和SPX2细胞核定位主要由SPX结构域决定 | 第49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-52页 |
| 第五章 SPX1和SPX2负调控PHR2功能机制研究 | 第52-63页 |
| 5.1 引言 | 第52页 |
| 5.2 材料与方法 | 第52-54页 |
| 5.2.1 水稻材料及培养方法 | 第52页 |
| 5.2.2 蛋白免疫共沉淀试验(Coimmunoprecipitation,co-IP) | 第52-53页 |
| 5.2.3 双分子荧光互补试验(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC) | 第53页 |
| 5.2.4 烟草双荧光瞬时表达实验 | 第53-54页 |
| 5.2.5 染色体免疫共沉淀实验(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第54页 |
| 5.3 结果 | 第54-61页 |
| 5.3.1 SPX1和SPX2与PHR2蛋白互作 | 第54-58页 |
| 5.3.2 SPX1和SPX2抑制PHR2结合P1BS | 第58-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 SPX1和SPX2与PHR2遗传互作研究 | 第63-68页 |
| 6.1 引言 | 第63页 |
| 6.2 材料与方法 | 第63-64页 |
| 6.2.1 水稻材料及培养方法 | 第63页 |
| 6.2.2 遗传材料发展 | 第63页 |
| 6.2.3 水稻有效磷测定 | 第63页 |
| 6.2.4 水稻总RNA提取及表达分析 | 第63-64页 |
| 6.3 结果 | 第64页 |
| 6.3.1 SPX1和SPX2与PHR2遗传互作 | 第64页 |
| 6.3.2 pt2突变抑制spx1和spx2突变体磷浓度积累 | 第64页 |
| 6.4 讨论 | 第64-68页 |
| 第七章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 7.1 结论 | 第68页 |
| 7.2 展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 附录 | 第80-90页 |
| 表1 水稻营养液配方 | 第80-81页 |
| 表2 RT-PCR,qRT-PCR和ChIP-PCR引物序列 | 第81-83页 |
| 表3 载体构建引物 | 第83-87页 |
| 表4 突变体鉴定引物 | 第87-88页 |
| 表5 凝胶迁移实验探针引物 | 第88-89页 |
| 表6 原位杂交实验探针引物 | 第89-90页 |
| 攻读博士学位期间发表的科研论文 | 第90页 |
