| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1. 绪论 | 第16-36页 |
| 1.1 双生病毒研究现状 | 第16-27页 |
| 1.1.1 双生病毒的发生与流行 | 第16-18页 |
| 1.1.2 双生病毒的基因组结构与分类 | 第18-23页 |
| 1.1.3 双生病毒卫星betasatellite及其编码的βC1蛋白的功能 | 第23-25页 |
| 1.1.4 双生病毒编码的βC1蛋白与植物寄主因子的互作 | 第25-27页 |
| 1.2 泛素/26S蛋白酶降解系统与植物病原物响应 | 第27-36页 |
| 1.2.1 泛素/26S蛋白酶降解系统概况 | 第27-34页 |
| 1.2.2 泛素连接酶E3对植物-病原物互作的响应 | 第34-36页 |
| 2. TYLCCNB βC1蛋白与烟草NtRFP1蛋白的互作鉴定 | 第36-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 2.1.1 植物材料与生长条件 | 第37页 |
| 2.1.2 菌株和质粒载体 | 第37-38页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第38页 |
| 2.1.4 载体构建 | 第38-39页 |
| 2.1.5 酵母双杂交实验(Yeast two-hybrid system,Y2H) | 第39-41页 |
| 2.1.6 BiFC试验(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC) | 第41-42页 |
| 2.2 结果与分析 | 第42-49页 |
| 2.2.1 酵母双杂交验证NtRFP1蛋白与βC1蛋白的互作 | 第42-44页 |
| 2.2.2 BiFC验证NtRFP1蛋白与βC1蛋白在植物体内的互作 | 第44-45页 |
| 2.2.3 NtRFP1蛋白与βC1蛋白的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 2.2.4 NtRFP1蛋白与βC1蛋白互作结构域的鉴定 | 第47-49页 |
| 2.3 讨论 | 第49-51页 |
| 3. 植物NtRFP1的性质研究 | 第51-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-56页 |
| 3.1.1 材料 | 第51-52页 |
| 3.1.2 引物合成 | 第52页 |
| 3.1.3 载体构建 | 第52-53页 |
| 3.1.4 农杆菌侵润接种和侵染性克隆的接种 | 第53页 |
| 3.1.5 共聚焦显微镜观察GFP荧光并拍照 | 第53页 |
| 3.1.6 real-time RT-PCR分析 | 第53-56页 |
| 3.2 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.2.1 NtRFP1的亚细胞定位分析 | 第56-57页 |
| 3.2.2 NtRFP1组织特异性表达分析 | 第57-59页 |
| 3.2.3 TYLCCNV/TYLCCNB侵染对NtRFP1 mRNA积累量的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.4 转基因βC1植株对其体内NtRFP1 mRNA积累量的影响 | 第60-61页 |
| 3.3 讨论 | 第61-63页 |
| 4. NtRFP1蛋白对TYLCCNV/TYLCCNB致病性的影响 | 第63-86页 |
| 4.1 材料与方法 | 第63-76页 |
| 4.1.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.1.2 引物合成 | 第64-65页 |
| 4.1.3 转基因质粒载体的构建 | 第65页 |
| 4.1.4 PVX载体的构建 | 第65-66页 |
| 4.1.5 分子实验方法 | 第66-71页 |
| 4.1.6 普通烟的遗传转化 | 第71-72页 |
| 4.1.7 转基因NtRFP1普通烟的鉴定 | 第72-73页 |
| 4.1.8 植物总DNA提取和Southern印迹分析 | 第73-75页 |
| 4.1.9 植物总蛋白的提取及Western印迹分析 | 第75-76页 |
| 4.2 结果与分析 | 第76-83页 |
| 4.2.1 转基因沉默和过表达NtRFP1普通烟的鉴定 | 第76-78页 |
| 4.2.2 NtRFP1蛋白对TYLCCNV/TYLCCNB诱导的病毒症状的影响 | 第78-79页 |
| 4.2.3 NtRFP1蛋白对植物中病毒DNA积累量的影响 | 第79-80页 |
| 4.2.4 NtRFP1蛋白对βC1蛋白诱导症状的影响 | 第80-81页 |
| 4.2.5 体内实验检测NtRFP1蛋白对βC1蛋白降解的促进作用 | 第81-83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-86页 |
| 5. 全文小结与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 附录 | 第96-104页 |
