| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 植物蔗糖代谢 | 第12-13页 |
| 2 蔗糖转化酶 | 第13-18页 |
| 2.1 蔗糖转化酶的分类 | 第13页 |
| 2.2 不同类型蔗糖转化酶的作用 | 第13-15页 |
| 2.3 蔗糖转化酶的结构特点 | 第15-16页 |
| 2.4 几种代表植物蔗糖转化酶的研究概况 | 第16-18页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 拟南芥细胞壁蔗糖转化酶基因AtCWINV4的表达分析与功能研究 | 第19-43页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.3 酶和试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.4 缓冲液、培养基、反应液 | 第20-21页 |
| 3 实验方法 | 第21-30页 |
| 3.1 PCR扩增 | 第21-23页 |
| 3.2 PCR产物的纯化 | 第23页 |
| 3.3 平端PCR产物的末端加A反应 | 第23页 |
| 3.4 DNA的乙醇沉淀 | 第23-24页 |
| 3.5 质粒载体、乙醇沉淀产物的酶切 | 第24页 |
| 3.6 从琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第24-25页 |
| 3.7 质粒载体与小片段DNA的连接 | 第25页 |
| 3.8 DH5α感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 3.9 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 3.10 质粒提取 | 第26页 |
| 3.11 农杆菌介导的拟南芥的转化(花序侵染法) | 第26-27页 |
| 3.12 拟南芥DNA的提取 | 第27页 |
| 3.13 拟南芥RNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.14 RNA中残留DNA的消化 | 第28页 |
| 3.15 RNA的逆转录 | 第28页 |
| 3.16 蔗糖转化酶酶活测定 | 第28-29页 |
| 3.17 蛋白含量的测定 | 第29页 |
| 3.18 可溶性糖含量的测定 | 第29-30页 |
| 3.19 可溶性糖标准曲线的制作 | 第30页 |
| 4 实验结果 | 第30-41页 |
| 4.1 载体构建 | 第30-33页 |
| 4.2 转基因拟南芥的DNA分子检测 | 第33-35页 |
| 4.3 转基因拟南芥中AtCWINV4的表达检测 | 第35-37页 |
| 4.4 转基因拟南芥中蔗糖转化酶酶活检测 | 第37-38页 |
| 4.5 转基因拟南芥中可溶性糖含量的分析检测 | 第38-39页 |
| 4.6 针对2x35S Enhancer的载体构建工作 | 第39-41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 拟南芥细胞壁蔗糖转化酶基因AtCWINV4对油菜的遗传转化 | 第43-52页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 实验材料 | 第43-45页 |
| 2.1 植物材料 | 第43页 |
| 2.2 质粒和菌种 | 第43-44页 |
| 2.3 试剂 | 第44页 |
| 2.4 培养基 | 第44-45页 |
| 3 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.1 农杆菌GV3101感受态的制备 | 第45页 |
| 3.2 农杆菌转化 | 第45-46页 |
| 3.3 油菜再生转化植株的获得与培养 | 第46-47页 |
| 3.4 油菜DNA的提取 | 第47页 |
| 3.5 油菜再生转化植株的分子检测 | 第47-48页 |
| 4 结果 | 第48-50页 |
| 4.1 油菜遗传转化到再生植株的获得 | 第48页 |
| 4.2 转基因油菜T_0代的分子检测 | 第48-50页 |
| 5 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 油菜蔗糖转化酶基因的电子克隆和生物信息学分析 | 第52-64页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 实验材料 | 第52页 |
| 2.1 数据材料 | 第52页 |
| 2.2 植物材料 | 第52页 |
| 3 实验方法 | 第52-53页 |
| 3.1 电子克隆获得油菜蔗糖转化酶基因序列 | 第52-53页 |
| 3.2 以油菜cDNA为模板扩增并测序检测获得的新生序列 | 第53页 |
| 3.3 油菜蔗糖转化酶基因的生物信息学分析 | 第53页 |
| 4 结果 | 第53-63页 |
| 4.1 油菜蔗糖转化酶基因的开放阅读框及其编码蛋白 | 第53-55页 |
| 4.2 扩增新生序列开放阅读框验证获得的油菜蔗糖转化酶基因 | 第55-57页 |
| 4.3 蛋白的一级结构及理化性质预测 | 第57页 |
| 4.4 跨膜分析 | 第57-58页 |
| 4.5 信号肽及导肽预测分析 | 第58-59页 |
| 4.6 蛋白的疏水性/亲水性预测和分析 | 第59-60页 |
| 4.7 二级结构预测分析 | 第60页 |
| 4.8 亚细胞定位 | 第60-61页 |
| 4.9 保守结构域分析 | 第61页 |
| 4.10 油菜蔗糖转化酶蛋白的氨基酸同源性分析 | 第61-63页 |
| 5 讨论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
