| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1 miRNA概述 | 第12-17页 |
| 1.1 miRNA的发现 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA的生物合成过程 | 第13-14页 |
| 1.3 miRNA的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.4 miRNA的功能 | 第15-17页 |
| 2 miRNA的研究方法 | 第17-20页 |
| 2.1 传统实验方法 | 第17页 |
| 2.2 微阵列芯片技术 | 第17-18页 |
| 2.3 新一代测序技术 | 第18-19页 |
| 2.4 生物信息分析 | 第19-20页 |
| 2.5 功能研究 | 第20页 |
| 3 miR-8/miR-200家族 | 第20-24页 |
| 3.1 基因结构及成熟miRNA序列 | 第20-21页 |
| 3.2 miR-8/miR-200家族的进化关系 | 第21-22页 |
| 3.3 miR-8/miR-200家族的多重功能 | 第22-24页 |
| 4 实验动物研究背景 | 第24-26页 |
| 4.1 黄颡鱼 | 第24-25页 |
| 4.2 斑马鱼 | 第25-26页 |
| 5 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-46页 |
| 1 实验材料 | 第27-29页 |
| 1.1 实验动物 | 第27页 |
| 1.2 所用载体 | 第27页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.4 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-46页 |
| 2.1 RNA抽提 | 第29-30页 |
| 2.2 小RNA库建立及测序 | 第30-31页 |
| 2.3 Illumina测序结果处理 | 第31-32页 |
| 2.4 小RNA库中miRNA表达谱分析 | 第32-33页 |
| 2.5 RNA逆转录 | 第33-34页 |
| 2.5.1 通用引物法 | 第33页 |
| 2.5.2 Stem-loop法 | 第33-34页 |
| 2.6 荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 2.7 HE染色 | 第35页 |
| 2.8 激素处理 | 第35页 |
| 2.9 动物基因组DNA提取 | 第35-36页 |
| 2.10 质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.10.1 真核表达质粒构建 | 第36页 |
| 2.10.2 启动子质粒构建 | 第36页 |
| 2.10.3 MicroRNA靶基因验证质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.10.4 载体点突变 | 第37页 |
| 2.11 体外转录合成mRNA | 第37-38页 |
| 2.12 显微注射 | 第38页 |
| 2.13 胚胎整体原位杂交（WISH） | 第38-40页 |
| 2.14 胚胎凋亡检测 | 第40-42页 |
| 2.14.1 Terminal transferase dUTP nick end labeling（TUNEL） | 第40-41页 |
| 2.14.2 活胚胎吖啶橙（Acridine orange, AO）染色 | 第41页 |
| 2.14.3 流式细胞技术（fluorescenceactivated cell sorting, FACS） | 第41-42页 |
| 2.15 蛋白实验 | 第42-43页 |
| 2.15.1 胚胎总蛋白提取 | 第42页 |
| 2.15.2 Western blot分析 | 第42-43页 |
| 2.16 293T细胞实验 | 第43-45页 |
| 2.16.1 细胞传代培养 | 第43页 |
| 2.16.2 细胞冻存保藏及冻存细胞的复苏 | 第43-44页 |
| 2.16.3 细胞转染及荧光素酶活性分析 | 第44-45页 |
| 2.17 数据分析 | 第45-46页 |
| 第三章 结果与分析 | 第46-71页 |
| 1 黄颡鱼性腺miRNA的转录组分析 | 第46-57页 |
| 1.1 RNA质检结果 | 第46页 |
| 1.2 测序数据产出总览 | 第46-47页 |
| 1.3 各类RNA数据库比对结果 | 第47-48页 |
| 1.4 黄颡鱼性腺miRNAs的表达模式 | 第48-52页 |
| 1.4.1 保守miRNAs和新miRNAs的鉴定 | 第48-49页 |
| 1.4.2 性别相关miRNAs的表达分析 | 第49-51页 |
| 1.4.3 精巢发育相关miRNAs的表达分析 | 第51-52页 |
| 1.5 荧光定量验证结果 | 第52-54页 |
| 1.6 一龄XY和YY精巢的组织学差异及miR-200家族的表达差异 | 第54-57页 |
| 2 miR-200家族在斑马鱼生长发育方面的功能研究 | 第57-71页 |
| 2.1 miR-200家族成员在胚胎发育时期的表达模式 | 第57-58页 |
| 2.2 miR-200家族成员调控生长激素内分泌轴的基因表达 | 第58-61页 |
| 2.3 miR-200调控斑马鱼胚胎的正常体长生长 | 第61-63页 |
| 2.4 胚胎发育时期过表达miR-200抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡 | 第63-65页 |
| 2.5 生长激素内分泌轴的多个关键基因是miR-200s的直接靶基因 | 第65-67页 |
| 2.6 生长激素依赖P53调控miR-200s的表达 | 第67-69页 |
| 2.7 miR-200启动子中潜在的p53结合位点与启动子活性相关 | 第69-71页 |
| 第四章 讨论 | 第71-76页 |
| 1 黄颡鱼性腺miRNAs表达模式及miR-200家族参与精巢发育 | 第71-73页 |
| 2 p53/miR-200s与GH/IGF轴反馈调控斑马鱼胚胎大小 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
