| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 英文缩写表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-20页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌的感染机制 | 第14-15页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 表位疫苗 | 第16-17页 |
| 1.5 Gap蛋白的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-38页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第21页 |
| 2.2.2 基因组DNA模版的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 目的基因gapC的扩增 | 第22页 |
| 2.2.4 目的基因的回收与纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 重组菌的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.6 GapC重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.7 MAbs的制备 | 第25-29页 |
| 2.2.8 MAbs性质的检测 | 第29-32页 |
| 2.2.9 筛选噬菌体肽库鉴定表位 | 第32-34页 |
| 2.2.10 抗原表位关键氨基酸鉴定 | 第34页 |
| 2.2.11 抗原表位菌体表面检测 | 第34-35页 |
| 2.2.12 表位的保守性分析 | 第35页 |
| 2.2.13 抗表位肽血清的调理吞噬作用 | 第35-36页 |
| 2.2.14 动物免疫及小鼠抗体水平的检测 | 第36-37页 |
| 2.2.15 数据处理 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-56页 |
| 3.1 GapC基因的重组与表达 | 第38-40页 |
| 3.1.1 pMD18-T-gapC重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| 3.1.2 pET-32a(+)-gapC重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.3 重组蛋白表达与Westernblotting鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 单克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.1 抗原抗体最佳稀释比例 | 第40页 |
| 3.2.2 免疫后小鼠血清抗体效价检测 | 第40-41页 |
| 3.2.3 细胞融合与筛选 | 第41页 |
| 3.3 单克隆抗体性质的检测 | 第41-45页 |
| 3.3.1 MAbs的纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.2 MAbs特异性的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.3 MAbs的Ig类与亚类的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 MAbs的生物学活性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.5 MAbs的稳定性 | 第45页 |
| 3.4 表位的鉴定与分析 | 第45-56页 |
| 3.4.1 噬菌体展示12肽库生物淘选 | 第45-46页 |
| 3.4.2 用夹心ELISA方法鉴定噬菌体阳性克隆 | 第46-47页 |
| 3.4.3 氨基酸定点突变 | 第47-50页 |
| 3.4.4 抗原表位菌体表面检测 | 第50-51页 |
| 3.4.5 抗原表位保守性分析 | 第51-53页 |
| 3.4.6 表位疫苗的主动免疫保护结果及抗体水平的检测 | 第53页 |
| 3.4.7 抗表位小鼠血清的调理吞噬作用 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 5 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录(一) | 第72-74页 |
| 附录(二) | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 个人简历 | 第78-79页 |
