| 中文摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 木质纤维素生物质的抗降解屏障及其降解酶的研究进展 | 第15-22页 |
| 1.1.1 木质纤维素生物质的抗降解屏障 | 第15-17页 |
| 1.1.2 木质纤维素降解酶的模块化结构 | 第17-21页 |
| 1.1.3 木质纤维素降解酶的催化和底物特异性 | 第21-22页 |
| 1.2 木质纤维素降解酶类相关的生物信息学研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.1 碳水化合物活性酶数据库(CAZy) | 第22-23页 |
| 1.2.2 纤维素酶的活性架构和理性设计 | 第23-25页 |
| 1.3 木质纤维素降解酶结合能力测定方法的研究进展 | 第25-29页 |
| 1.3.1 米氏方程法 | 第25-26页 |
| 1.3.2 吸附实验 | 第26-27页 |
| 1.3.3 等温滴定量热(ITC)法 | 第27-28页 |
| 1.3.4 Binding电泳法 | 第28页 |
| 1.3.5 荧光光谱法 | 第28-29页 |
| 1.4 利题依据 | 第29-31页 |
| 第2章 木质纤维素降解酶功能模块的活性架构分析 | 第31-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 2.1.1 生物信息学网站与分析软件 | 第31-32页 |
| 2.1.2 糖苷水解酶活性中心序列谱的绘制 | 第32-33页 |
| 2.2 结果与分析 | 第33-41页 |
| 2.2.1 GH12、CBM4、CBM1家族系统发育树 | 第33-36页 |
| 2.2.2 GH12、CBM1、CBM4家族活性架构功能区分析 | 第36-37页 |
| 2.2.3 GH12、CBM1、CBM4家族表面电势分析 | 第37-38页 |
| 2.2.4 GH12、CBM1、CBM4家族活性中心序列谱 | 第38-41页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 木质纤维素降解酶功能模块的异源表达及结合纤维素能力的定量分析 | 第43-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-53页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 主要的仪器及试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要的培养基 | 第44页 |
| 3.1.4 重组质粒的构建与扩增 | 第44-48页 |
| 3.1.5 目的蛋白的异源表达 | 第48-50页 |
| 3.1.6 目的蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3.1.7 SDS-PAGE检测目的蛋白表达纯化情况 | 第51页 |
| 3.1.8 小分子量电泳技术的建立 | 第51-52页 |
| 3.1.9 蛋白浓度的测定 | 第52页 |
| 3.1.10 等温滴定量热法(ITC)测定结合动力学常数和热力学常数 | 第52-53页 |
| 3.2 结果与分析 | 第53-60页 |
| 3.2.1 重组质粒的构建与扩增 | 第53-54页 |
| 3.2.2 EGⅢ、CBM1和CBM4的异源表达和分离纯化 | 第54-56页 |
| 3.2.3 DNS定糖法测定酶活力 | 第56-57页 |
| 3.2.4 ITC法测定各结构域与底物结合力的分析 | 第57-60页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第60-61页 |
| 第4章 快速表征糖苷水解酶结合力的电泳技术的建立 | 第61-73页 |
| 4.1 材料和方法 | 第61-64页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第62页 |
| 4.1.3 菌体培养与酶液制备 | 第62页 |
| 4.1.4 快速测定纤维素酶与底物结合力的电泳技术的建立 | 第62-63页 |
| 4.1.5 结合力电泳条带迁移率的定量分析 | 第63-64页 |
| 4.2 结果与分析 | 第64-71页 |
| 4.2.1 Binding电泳技术的优化 | 第64-65页 |
| 4.2.2 Binding电泳条带相对迁移率数值有效性的分析 | 第65页 |
| 4.2.3 具有催化活性酶的Binding电泳分析 | 第65-67页 |
| 4.2.4 无催化活性酶的Binding电泳分析 | 第67-71页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 第5章 荧光光谱法测定纤维素酶各模块与底物的结合能力 | 第73-83页 |
| 5.1 材料和方法 | 第73-74页 |
| 5.1.1 主要试剂和仪器 | 第73页 |
| 5.1.2 纤维素酶不同结构域蛋白的制备 | 第73页 |
| 5.1.3 荧光光谱的测定 | 第73-74页 |
| 5.2 结果与分析 | 第74-80页 |
| 5.2.1 EGⅢ及其单突变体的荧光光谱定量分析 | 第74-76页 |
| 5.2.2 EGⅢ-E200Q：W22位点双突的荧光光谱定量分析 | 第76-79页 |
| 5.2.3 CBM1和CBM4的荧光光谱定量分析 | 第79-80页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第80-83页 |
| 全文总结与展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第93页 |
