摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 绪论 | 第10-20页 |
1.1 酶促反应研究进展 | 第10-14页 |
1.1.1 酶促反应研究进展 | 第10-11页 |
1.1.2 诱导契合学说 | 第11-12页 |
1.1.3 α—淀粉酶作用机理 | 第12-14页 |
1.2 Zeta电位及其应用 | 第14-16页 |
1.2.1 Zeta电位 | 第14-15页 |
1.2.2 Zeta电位研究酶促反应的可行性 | 第15-16页 |
1.3 酶学研究方法 | 第16-18页 |
1.3.1 酶纯度的鉴定 | 第16页 |
1.3.2 酶活力测量方法 | 第16-17页 |
1.3.3 底物浓度及温度对酶促反应的影响 | 第17页 |
1.3.4 酶溶液构象的研究方法 | 第17-18页 |
1.5 本课题研究的意义和目的 | 第18-19页 |
1.6 本课题研究的主要内容 | 第19-20页 |
第二章 酶分子Zeta电位的测量 | 第20-29页 |
2.1 引言 | 第20页 |
2.2 实验材料与方法 | 第20-24页 |
2.2.1 实验材料 | 第20-22页 |
2.2.2 实验方法 | 第22-24页 |
2.2.2.1 样品酶制备 | 第22页 |
2.2.2.2 纯度鉴定 | 第22页 |
2.2.2.3 酶分子Zeta电位的测定 | 第22页 |
2.2.2.4 样品酶pH梯度滴定 | 第22-23页 |
2.2.2.5 淀粉pH梯度滴定 | 第23页 |
2.2.2.6 温度梯度 | 第23页 |
2.2.2.7 离子强度梯度 | 第23页 |
2.2.2.8 添加底物后酶分子Zeta电位的测量 | 第23页 |
2.2.2.9 U型管实验 | 第23-24页 |
2.2.2.10 添加产物后酶分子 Zeta 电位变化 | 第24页 |
2.3 实验结果与分析 | 第24-28页 |
2.3.1 酶分子测量条件的确定 | 第24-27页 |
2.3.1.1 酶分子浓度的确定 | 第24-25页 |
2.3.1.2 酶分子Zeta电位pH滴定曲线 | 第25页 |
2.3.1.3 淀粉分子Zeta电位pH滴定曲线 | 第25-26页 |
2.3.1.4 酶分子Zeta电位温度梯度 | 第26-27页 |
2.3.1.5 酶分子Zeta电位离子强度梯度 | 第27页 |
2.3.2 添加底物后酶分子电位测量条件的确定 | 第27-28页 |
2.3.2.1 添加底物后酶分子Zeta的测定 | 第27页 |
2.3.2.2 U型管实验 | 第27页 |
2.3.2.3 底物和终产物对Zeta的影响 | 第27-28页 |
2.4 本章小结 | 第28-29页 |
第三章 酶促反应过程中酶分子Zeta电位的测量 | 第29-35页 |
3.1 引言 | 第29页 |
3.2 实验材料与方法 | 第29-31页 |
3.2.1 实验材料 | 第29-30页 |
3.2.2 实验方法 | 第30-31页 |
3.2.2.1 缓冲液的配制 | 第30页 |
3.2.2.2 测量不同底物添加量Zeta电位 | 第30页 |
3.2.2.3 酶促反应过程中不同时间Zeta电位变化 | 第30页 |
3.2.2.4 诱导酶及反复诱导 | 第30-31页 |
3.2.2.5 诱导酶反应温度梯度 | 第31页 |
3.3 实验结果与分析 | 第31-34页 |
3.3.1 不同底物添加量酶分子Zeta电位变化曲线 | 第31-32页 |
3.3.2 酶促反应过程中酶分子Zeta电位变化曲线 | 第32页 |
3.3.3 不同温度条件下酶促反应Zeta电位变化曲线 | 第32-33页 |
3.3.4 诱导酶及反复诱导 | 第33-34页 |
3.3.5 诱导酶温度梯度及再次诱导 | 第34页 |
3.4 本章小结 | 第34-35页 |
第四章 α—淀粉酶结构研究 | 第35-42页 |
4.1 引言 | 第35页 |
4.2 实验材料与方法 | 第35-38页 |
4.2.1 实验材料 | 第35-36页 |
4.2.2 实验方法 | 第36-38页 |
4.2.2.1 缓冲液的配置 | 第36页 |
4.2.2.2 红外光谱测定 | 第36页 |
4.2.2.3 圆二色谱测定 | 第36-37页 |
4.2.2.4 离子色谱测定 | 第37-38页 |
4.2.2.5 Stopped Flow快速动力学测定 | 第38页 |
4.3 实验结果与分析 | 第38-41页 |
4.3.1 酶分子反应前后红外光谱变化 | 第38-39页 |
4.3.2 α—淀粉酶反应前后二级结构变化 | 第39-40页 |
4.3.3 α—淀粉酶底物残糖测定 | 第40页 |
4.3.4 Stopped Flow实验结果 | 第40-41页 |
4.4 本章小结 | 第41-42页 |
第五章 α—淀粉酶酶活测量及热处理 | 第42-47页 |
5.1 引言 | 第42页 |
5.2 实验材料与方法 | 第42-44页 |
5.2.1 实验材料 | 第42-43页 |
5.2.2 实验方法 | 第43-44页 |
5.2.2.1 碘-淀粉法测酶活 | 第43页 |
5.2.2.2 热处理对α—淀粉酶酶活力和结构的影响 | 第43-44页 |
5.2.2.3 底物对酶分子热稳定性的影响 | 第44页 |
5.2.2.4 ITC实验初探 | 第44页 |
5.3 结果分析 | 第44-46页 |
5.3.1 逐次添加底物后酶活力变化 | 第44-45页 |
5.3.2 热处理对酶活力和二级结构影响 | 第45页 |
5.3.3 底物对热稳定性影响 | 第45-46页 |
5.3.4 ITC实验初探 | 第46页 |
5.4 本章小结 | 第46-47页 |
第六章 结论与展望 | 第47-49页 |
参考文献 | 第49-53页 |
致谢 | 第53页 |