| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 1 犬细小病毒的概述 | 第11-12页 |
| 2 犬细小病毒的生物学特性 | 第12-13页 |
| 3 犬细小病毒基因结构及编码蛋白功能 | 第13-14页 |
| 4 犬细小病毒病的流行 | 第14页 |
| 5 犬细小病毒的致病机理及临床病理特征 | 第14-15页 |
| 6 犬细小病毒疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 7 犬细小病毒病的防治 | 第16-17页 |
| 8 犬细小病毒的遗传变异 | 第17-18页 |
| 9 研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 材料与方法 | 第19-32页 |
| 1 材料 | 第19-23页 |
| 1.1 病料及细胞株 | 第19页 |
| 1.2 试验动物 | 第19页 |
| 1.3 载体及主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 1.5 试验所需主要溶液的配置 | 第20-23页 |
| 1.5.1 细胞培养用溶液配置 | 第20页 |
| 1.5.2 分子克隆所需溶液的配置 | 第20-21页 |
| 1.5.3 琼脂糖凝胶电泳溶液的配置 | 第21页 |
| 1.5.4 SDS-PAGE电泳溶液的配置 | 第21-22页 |
| 1.5.5 蛋白纯化所需溶液的配置 | 第22页 |
| 1.5.6 Western-blot及ELISA所需溶液的配置 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-32页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2 犬细小病毒YBYJ株的分离 | 第23-24页 |
| 2.2.1 F81细胞的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 病料的采集 | 第24页 |
| 2.2.3 犬细小病毒的分离 | 第24页 |
| 2.3 犬细小病毒的分离鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.1 病毒的间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第24页 |
| 2.3.2 血凝试验(HA)及TCID_(50)的测定 | 第24-25页 |
| 2.3.3 病毒回归试验 | 第25页 |
| 2.3.4 病毒的分子生物学鉴定 | 第25页 |
| 2.4 犬细小病毒全基因组的提取 | 第25-26页 |
| 2.5 犬细小病毒VP2基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.6 目的基因的纯化回收 | 第27页 |
| 2.7 目的基因的克隆 | 第27页 |
| 2.8 重组克隆的转化 | 第27页 |
| 2.9 重组克隆的筛选 | 第27-28页 |
| 2.10 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.11 重组表达蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.11.1 重组表达蛋白的优化诱导表达 | 第29页 |
| 2.11.2 重组表达蛋白的可溶分析 | 第29-30页 |
| 2.12 重组表达蛋白的纯化 | 第30页 |
| 2.13 重组表达蛋白的Western-blot分析 | 第30页 |
| 2.14 多克隆抗体的制备 | 第30-31页 |
| 2.15 多克隆抗体效价的检测 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-44页 |
| 3.1 病毒分离与培养结果 | 第32页 |
| 3.2 病毒的分离鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2.1 病毒的间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 病毒血凝(HA)试验及TCID_(50)测定 | 第33页 |
| 3.2.3 病毒回归试验 | 第33页 |
| 3.2.4 病毒的分子生物学鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 犬细小病毒VP2基因PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第34-36页 |
| 3.3.1 犬细小病毒VP2基因PCR扩增 | 第34-35页 |
| 3.3.2 克隆质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 CPV-VP2基因序列的测定及分析 | 第36-40页 |
| 3.4.1 CPV-VP2基因序列分析 | 第36页 |
| 3.4.2 CPV-VP2进化树分析 | 第36-39页 |
| 3.4.3 CPV-VP2蛋白特性分析 | 第39-40页 |
| 3.5 重组表达质粒pGEX-CPV-VP2的鉴定 | 第40页 |
| 3.6 重组表达蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.7 重组表达蛋白的可溶性分析 | 第41-42页 |
| 3.8 重组表达蛋白的纯化 | 第42页 |
| 3.9 重组表达蛋白Western-blot分析 | 第42-43页 |
| 3.10 多克隆抗体效价的测定 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58页 |
