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猪抗蓝耳病、圆环病毒病相关基因的鉴定与功能分析

符号说明第5-10页
中文摘要第10-13页
Abstract第13-17页
1 前言第18-38页
    1.1 猪蓝耳病的相关研究进展第18-21页
        1.1.1 猪对PRRSV感染存在抗性差异第18-19页
        1.1.2 USP18基因的研究现状第19-20页
        1.1.3 Mx1基因的研究现状第20-21页
    1.2 猪圆环病毒的研究进展第21-33页
        1.2.1 猪圆环病毒基因组和分类第22-23页
        1.2.2 猪圆环病毒的起源和演化第23-24页
        1.2.3 猪圆环病毒的流行现状第24-27页
        1.2.4 临床疾病第27-29页
        1.2.5 PCV2发病机制第29-32页
        1.2.6 在PCV2发病机制中细胞因子的作用第32-33页
    1.3 RNA-seq技术第33-35页
    1.4 SERPINA1基因的研究现状第35-36页
    1.5 本研究的目的及意义第36-38页
2 材料与方法第38-69页
    2.1 试验材料第38-42页
        2.1.1 试验动物及攻毒第38页
        2.1.2 样品采集第38页
        2.1.3 毒株第38页
        2.1.4 菌株及载体第38页
        2.1.5 主要实验仪器和设备第38-39页
        2.1.6 主要试剂和试剂盒及来源第39-40页
        2.1.7 常用试剂的配制第40-41页
        2.1.8 主要数据库和生物学软件第41-42页
    2.2 实验方法第42-69页
        2.2.1 猪基因组DNA的提取第42页
        2.2.2 总RNA的提取及检测第42-44页
        2.2.3 质粒DNA的提取(Tiangen试剂盒)第44页
        2.2.4 凝胶回收PCR产物第44-45页
        2.2.5 USP18和Mx1基因 5'调控区分析第45-52页
        2.2.6 猪对PCV2感染的生物学反应第52-61页
        2.2.7 RNA-seq分析肺组织差异表达基因第61-69页
        2.2.8 统计分析第69页
3 结果与分析第69-104页
    3.1 USP18基因 5'调控区多态性分析第69-73页
        3.1.1 大蒲莲猪和大长杂交商品猪启动子活性比较第69-70页
        3.1.2 USP18基因启动子删除载体双荧光素酶活性分析第70-71页
        3.1.3 USP18基因启动子区突变对PRRSV感染的影响第71-72页
        3.1.4 不同品种中G–1533A位点的多态性分析第72-73页
    3.2 Mx1基因 5'调控区多态分析第73-76页
        3.2.1 Mx1基因 5'调控区扩增及载体构建第73-74页
        3.2.2 Mx1基因启动子区删除载体荧光素酶活性比较第74-75页
        3.2.3 PRRSV感染对Mx1基因不同载体启动子活性影响第75页
        3.2.4 不同猪种中?547位点多态性的群体检测第75-76页
    3.3 不同品种猪对PCV2感染的生物学反应第76-87页
        3.3.1 莱芜猪和大长杂交商品猪对感染PCV2后的临床症状比较第76-77页
        3.3.2 莱芜猪和大长杂交商品猪体温体重变化第77-78页
        3.3.3 剖检病变第78-79页
        3.3.4 PCV2感染 35d时莱芜猪和大长杂交商品猪肺脏和脾脏的病理变化第79-80页
        3.3.5 PCV2感染对免疫球蛋白IgG的影响第80-82页
        3.3.6 PCR测定莱芜猪和大长杂交商品猪血清中PCV2病毒的含量第82-83页
        3.3.7 莱芜猪和大长杂交商品猪感染PCV2后血清中病毒拷贝数变化第83-85页
        3.3.8 PCV2感染不同时期猪细胞因子蛋白水平表达的变化第85-87页
    3.4 莱芜猪和大长杂交商品猪肺组织差异表达基因的筛选第87-104页
        3.4.1 总RNA质量检测第87-88页
        3.4.2 表达谱测序及生物信息学分析第88-94页
        3.4.3 差异表达基因的筛选第94-96页
        3.4.4 差异表达基因的GO功能注释结果第96-99页
        3.4.5 差异基因KEGG分析第99-101页
        3.4.6 差异表达基因的定量PCR检测第101-104页
4 讨论第104-111页
    4.1 与PRRSV抗性相关的两个基因启动子区多态性分析第104-106页
        4.1.1 USP18基因启动子区多态性分析第104-105页
        4.1.2 Mx1基因启动子区多态性分析第105-106页
    4.2 莱芜猪和大长杂交商品猪对PCV2感染的临床症状第106-107页
    4.3 PCV2感染后血清中细胞因子蛋白水平的动态变化第107-109页
    4.4 差异表达基因的筛选与鉴定第109-111页
5 结论第111-112页
参考 文献第112-126页
致谢第126-127页
附录第127-129页
博士期间发表论文和专利情况第129-130页

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