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弓形虫荧光定量PCR检测方法及HRM分型方法的建立

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
英文缩略表第7-12页
1 前言第12-16页
2 材料与方法第16-33页
    2.1 材料第16-18页
        2.1.1 主要仪器第16页
        2.1.2 主要试剂第16-17页
        2.1.3 样品第17-18页
        2.1.5 缓冲液及其它溶液配制第18页
    2.2 方法第18-33页
        2.2.1 弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立第18-29页
            2.2.1.1 弓形虫PRU株的传代复苏第18页
            2.2.1.2 弓形虫PRU株基因组DNA的提取第18-19页
            2.2.1.3 大片段引物的设计第19-20页
            2.2.1.4 GRA7基因的PCR扩增第20-21页
            2.2.1.5 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析第21页
            2.2.1.6 PCR扩增产物的回收与纯化第21-22页
            2.3.1.7 PCR纯化产物的连接与转化第22-23页
            2.2.1.8 重组质粒的提取第23-24页
            2.2.1.9 重组质粒的凝胶电泳鉴定第24页
            2.2.1.10 重组质粒的酶切鉴定第24-25页
            2.2.1.11 重组质粒的测序鉴定第25页
            2.2.1.12 重组阳性质粒的检测第25页
            2.2.1.13 质粒标准品的制备第25-26页
            2.2.1.14 qPCR小片段引物设计第26页
            2.2.1.15 小片段引物PCR扩增第26-27页
            2.2.1.16 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析第27页
            2.2.1.17 Real-time PCR反应体系与条件第27-28页
            2.2.1.18 Real-time PCR标准曲线的建立第28页
            2.2.1.19 Real-time PCR 特异性实验第28页
            2.2.1.20 重复性实验第28页
            2.2.1.21 敏感性实验第28页
            2.2.1.22 临床样品的检测第28-29页
        2.2.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立第29-33页
            2.2.2.1 弓形虫RH株和VEG株的传代复苏第29页
            2.2.2.2 弓形虫RH株和VEG株DNA的提取第29-30页
            2.2.2.3 GRA7基因的PCR扩增第30页
            2.2.2.4 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析第30页
            2.2.2.5 PCR扩增产物的回收与纯化第30页
            2.2.2.6 PCR纯化产物的连接与转化第30页
            2.2.2.7 重组质粒的提取第30页
            2.2.2.8 重组质粒的凝胶电泳鉴定第30-31页
            2.2.2.9 重组质粒的酶切鉴定第31页
            2.2.2.10 重组质粒的测序鉴定第31页
            2.2.2.11 重组阳性质粒的检测第31页
            2.2.1.12 阳性质粒标准品的制备第31页
            2.2.2.13 qPCR-HRM小片段引物设计第31页
            2.2.2.14 qPCR-HRM扩增第31-32页
            2.2.2.15 qPCR-HRM扩增产物检测第32页
            2.2.2.16 重复性检测第32页
            2.2.2.17 敏感性检测第32-33页
            2.2.2.18 临床样品的检测第33页
3 结果与分析第33-47页
    3.1 弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立结果与分析第33-40页
        3.1.1 GRA7基因的PCR扩增结果第33页
        3.1.2 重组质粒的电泳结果第33-34页
        3.1.3 重组质粒的酶切鉴定结果第34-35页
        3.1.4 重组质粒的测序鉴定结果第35页
        3.1.5 小片段引物PCR扩增结果第35页
        3.1.6 建立的Real-time PCR标准曲线第35-36页
        3.1.7 Real-time PCR特异性实验结果第36-37页
        3.1.8 重复性实验结果第37-38页
        3.1.9 敏感性实验结果第38-39页
        3.1.10 临床样品的检测结果第39-40页
    3.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立结果与分析第40-47页
        3.2.0 GRA7基因的PCR扩增结果第40页
        3.2.1 重组质粒的电泳结果第40-41页
        3.2.2 重组质粒的酶切鉴定结果第41-42页
        3.2.3 重组质粒的测序鉴定结果第42页
        3.2.4 qPCR-HRM扩增结果第42-43页
        3.2.5 qPCR-HRM扩增产物检测结果第43页
        3.2.6 重复性检测结果第43-45页
        3.2.7 敏感性检测结果第45-46页
        3.2.8 临床样品的检测结果第46-47页
4 讨论与结论第47-53页
    4.1 讨论第47-52页
        4.1.1 弓形虫病荧光定量PCR检测方法的建立第47-50页
        4.1.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立第50-52页
    4.2 结论第52-53页
致谢第53-54页
参考文献第54-61页
附录A 弓形虫qPCR检测方法重复性实验原始数据第61-62页
附录B 360 份临床样品qPCR和PCR检测原始数据第62-67页
附录C 弓形虫HRM方法稳定性检测原始数据第67-68页
附录D 弓形虫PRU株GRA7测序比对结果第68-69页
附录E 弓形虫RH株GRA7测序比对结果第69-70页
附录F 弓形虫VEG株GRA7测序比对结果第70页

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