| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-33页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 样品 | 第17-18页 |
| 2.1.5 缓冲液及其它溶液配制 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-33页 |
| 2.2.1 弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立 | 第18-29页 |
| 2.2.1.1 弓形虫PRU株的传代复苏 | 第18页 |
| 2.2.1.2 弓形虫PRU株基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.1.3 大片段引物的设计 | 第19-20页 |
| 2.2.1.4 GRA7基因的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.1.5 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析 | 第21页 |
| 2.2.1.6 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第21-22页 |
| 2.3.1.7 PCR纯化产物的连接与转化 | 第22-23页 |
| 2.2.1.8 重组质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.1.9 重组质粒的凝胶电泳鉴定 | 第24页 |
| 2.2.1.10 重组质粒的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.1.11 重组质粒的测序鉴定 | 第25页 |
| 2.2.1.12 重组阳性质粒的检测 | 第25页 |
| 2.2.1.13 质粒标准品的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.1.14 qPCR小片段引物设计 | 第26页 |
| 2.2.1.15 小片段引物PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.1.16 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析 | 第27页 |
| 2.2.1.17 Real-time PCR反应体系与条件 | 第27-28页 |
| 2.2.1.18 Real-time PCR标准曲线的建立 | 第28页 |
| 2.2.1.19 Real-time PCR 特异性实验 | 第28页 |
| 2.2.1.20 重复性实验 | 第28页 |
| 2.2.1.21 敏感性实验 | 第28页 |
| 2.2.1.22 临床样品的检测 | 第28-29页 |
| 2.2.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立 | 第29-33页 |
| 2.2.2.1 弓形虫RH株和VEG株的传代复苏 | 第29页 |
| 2.2.2.2 弓形虫RH株和VEG株DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 GRA7基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.2.2.4 PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析 | 第30页 |
| 2.2.2.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第30页 |
| 2.2.2.6 PCR纯化产物的连接与转化 | 第30页 |
| 2.2.2.7 重组质粒的提取 | 第30页 |
| 2.2.2.8 重组质粒的凝胶电泳鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.2.9 重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.2.10 重组质粒的测序鉴定 | 第31页 |
| 2.2.2.11 重组阳性质粒的检测 | 第31页 |
| 2.2.1.12 阳性质粒标准品的制备 | 第31页 |
| 2.2.2.13 qPCR-HRM小片段引物设计 | 第31页 |
| 2.2.2.14 qPCR-HRM扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.2.15 qPCR-HRM扩增产物检测 | 第32页 |
| 2.2.2.16 重复性检测 | 第32页 |
| 2.2.2.17 敏感性检测 | 第32-33页 |
| 2.2.2.18 临床样品的检测 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| 3.1 弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立结果与分析 | 第33-40页 |
| 3.1.1 GRA7基因的PCR扩增结果 | 第33页 |
| 3.1.2 重组质粒的电泳结果 | 第33-34页 |
| 3.1.3 重组质粒的酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.1.4 重组质粒的测序鉴定结果 | 第35页 |
| 3.1.5 小片段引物PCR扩增结果 | 第35页 |
| 3.1.6 建立的Real-time PCR标准曲线 | 第35-36页 |
| 3.1.7 Real-time PCR特异性实验结果 | 第36-37页 |
| 3.1.8 重复性实验结果 | 第37-38页 |
| 3.1.9 敏感性实验结果 | 第38-39页 |
| 3.1.10 临床样品的检测结果 | 第39-40页 |
| 3.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立结果与分析 | 第40-47页 |
| 3.2.0 GRA7基因的PCR扩增结果 | 第40页 |
| 3.2.1 重组质粒的电泳结果 | 第40-41页 |
| 3.2.2 重组质粒的酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.2.3 重组质粒的测序鉴定结果 | 第42页 |
| 3.2.4 qPCR-HRM扩增结果 | 第42-43页 |
| 3.2.5 qPCR-HRM扩增产物检测结果 | 第43页 |
| 3.2.6 重复性检测结果 | 第43-45页 |
| 3.2.7 敏感性检测结果 | 第45-46页 |
| 3.2.8 临床样品的检测结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论与结论 | 第47-53页 |
| 4.1 讨论 | 第47-52页 |
| 4.1.1 弓形虫病荧光定量PCR检测方法的建立 | 第47-50页 |
| 4.1.2 弓形虫HRM基因分型方法的建立 | 第50-52页 |
| 4.2 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录A 弓形虫qPCR检测方法重复性实验原始数据 | 第61-62页 |
| 附录B 360 份临床样品qPCR和PCR检测原始数据 | 第62-67页 |
| 附录C 弓形虫HRM方法稳定性检测原始数据 | 第67-68页 |
| 附录D 弓形虫PRU株GRA7测序比对结果 | 第68-69页 |
| 附录E 弓形虫RH株GRA7测序比对结果 | 第69-70页 |
| 附录F 弓形虫VEG株GRA7测序比对结果 | 第70页 |
