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小鼠CYP2R1基因的序列分析、真核表达及其对Hela细胞增殖作用的研究

摘要第4-6页
abstract第6-7页
第1章 绪论第11-25页
    1.1 维生素D概述第11-16页
        1.1.1 维生素D的代谢与生理功能第11-13页
        1.1.2 维生素D与人类疾病第13-15页
        1.1.3 维生素D类药物第15-16页
    1.2 维生素D 25-羟基化酶第16-20页
        1.2.1 维生素D 25-羟基化酶概述第16-17页
        1.2.2 机体内其他 25-羟基化酶第17-20页
    1.3 CYP2R1第20-22页
        1.3.1 生理功能与分布第20页
        1.3.2 CYP2R1的结构第20-21页
        1.3.3 CYP2R1的异源表达第21-22页
        1.3.4 CYP2R1与人类疾病第22页
    1.4 本研究的目的及意义第22-25页
第2章 小鼠CYP2R1的序列分析第25-37页
    2.1 引言第25页
    2.2 实验方法第25-26页
    2.3 结果与分析第26-36页
        2.3.1 蛋白质一级结构分析第26-32页
        2.3.2 小鼠CYP2R1二级结构分析第32-33页
        2.3.3 小鼠CYP2R1三级结构预测第33-36页
    2.4 讨论第36-37页
第3章 小鼠CYP2R1基因的克隆与表达第37-59页
    3.1 引言第37页
    3.2 实验材料第37-40页
        3.2.1 菌株与细胞第37页
        3.2.2 主要仪器与设备第37-38页
        3.2.3 主要试剂第38-39页
        3.2.4 试剂配制第39-40页
    3.3 实验方法第40-53页
        3.3.1 小鼠肝脏RNA的提取与检测第40页
        3.3.2 RNA反转录为与检测第40-42页
        3.3.3 小鼠CYP2R1的PCR扩增第42-43页
        3.3.4 T-A连接与转化第43-44页
        3.3.5 筛选阳性克隆第44-45页
        3.3.6 质粒提取与检测第45-46页
        3.3.7 表达引物设计第46页
        3.3.8 CYP2R1片段扩增与pcDNA3.1(+)质粒的制备第46-47页
        3.3.9 pcDNA3.1(+)质粒与CYP2R1的双酶切第47-48页
        3.3.10 目的片段与表达载体连接第48页
        3.3.11 转化与培养第48-49页
        3.3.12 重组质粒提取与检测第49-51页
        3.3.13 Hela细胞培养第51页
        3.3.14 质粒DNA转染Hela细胞第51页
        3.3.15 qPCR检测第51-52页
        3.3.16 Western Blot检测第52-53页
    3.4 结果与分析第53-57页
        3.4.1 RNA提取与cDNA检测第53-54页
        3.4.2 小鼠CYP2R1基因扩增第54页
        3.4.3 小鼠CYP2R1基因T-A克隆第54-55页
        3.4.4 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的构建第55-56页
        3.4.5 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的qPCR检测第56-57页
        3.4.6 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的Western Blot第57页
    3.5 讨论第57-59页
第4章 小鼠CYP2R1对Hela细胞增殖的影响第59-67页
    4.1 引言第59页
    4.2 实验材料第59-60页
        4.2.1 主要仪器与设备第59页
        4.2.3 主要试剂第59-60页
    4.3 实验方法第60-62页
        4.3.1 Hela细胞的培养第60页
        4.3.2 细胞转染第60页
        4.3.3 Hela细胞的划痕培养第60页
        4.3.4 MTT实验第60-61页
        4.3.5 qPCR检测第61-62页
    4.4 实验结果与分析第62-64页
        4.4.1 Hela细胞划痕培养第62-63页
        4.4.2 MTT法检测Hela细胞的增殖第63页
        4.4.3 qPCR检测细胞周期基因的表达第63-64页
    4.5 讨论第64-67页
小结第67-69页
参考文献第69-79页
攻读硕士学位期间取得学术成果第79-81页
致谢第81页

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