| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 维生素D概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 维生素D的代谢与生理功能 | 第11-13页 |
| 1.1.2 维生素D与人类疾病 | 第13-15页 |
| 1.1.3 维生素D类药物 | 第15-16页 |
| 1.2 维生素D 25-羟基化酶 | 第16-20页 |
| 1.2.1 维生素D 25-羟基化酶概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 机体内其他 25-羟基化酶 | 第17-20页 |
| 1.3 CYP2R1 | 第20-22页 |
| 1.3.1 生理功能与分布 | 第20页 |
| 1.3.2 CYP2R1的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.3 CYP2R1的异源表达 | 第21-22页 |
| 1.3.4 CYP2R1与人类疾病 | 第22页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第22-25页 |
| 第2章 小鼠CYP2R1的序列分析 | 第25-37页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-36页 |
| 2.3.1 蛋白质一级结构分析 | 第26-32页 |
| 2.3.2 小鼠CYP2R1二级结构分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 小鼠CYP2R1三级结构预测 | 第33-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第3章 小鼠CYP2R1基因的克隆与表达 | 第37-59页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 菌株与细胞 | 第37页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.4 试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-53页 |
| 3.3.1 小鼠肝脏RNA的提取与检测 | 第40页 |
| 3.3.2 RNA反转录为与检测 | 第40-42页 |
| 3.3.3 小鼠CYP2R1的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.4 T-A连接与转化 | 第43-44页 |
| 3.3.5 筛选阳性克隆 | 第44-45页 |
| 3.3.6 质粒提取与检测 | 第45-46页 |
| 3.3.7 表达引物设计 | 第46页 |
| 3.3.8 CYP2R1片段扩增与pcDNA3.1(+)质粒的制备 | 第46-47页 |
| 3.3.9 pcDNA3.1(+)质粒与CYP2R1的双酶切 | 第47-48页 |
| 3.3.10 目的片段与表达载体连接 | 第48页 |
| 3.3.11 转化与培养 | 第48-49页 |
| 3.3.12 重组质粒提取与检测 | 第49-51页 |
| 3.3.13 Hela细胞培养 | 第51页 |
| 3.3.14 质粒DNA转染Hela细胞 | 第51页 |
| 3.3.15 qPCR检测 | 第51-52页 |
| 3.3.16 Western Blot检测 | 第52-53页 |
| 3.4 结果与分析 | 第53-57页 |
| 3.4.1 RNA提取与cDNA检测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 小鼠CYP2R1基因扩增 | 第54页 |
| 3.4.3 小鼠CYP2R1基因T-A克隆 | 第54-55页 |
| 3.4.4 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.4.5 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的qPCR检测 | 第56-57页 |
| 3.4.6 PCDNA3.1-CYP2R1真核表达载体的Western Blot | 第57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第4章 小鼠CYP2R1对Hela细胞增殖的影响 | 第59-67页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.2.1 主要仪器与设备 | 第59页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 4.3.1 Hela细胞的培养 | 第60页 |
| 4.3.2 细胞转染 | 第60页 |
| 4.3.3 Hela细胞的划痕培养 | 第60页 |
| 4.3.4 MTT实验 | 第60-61页 |
| 4.3.5 qPCR检测 | 第61-62页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第62-64页 |
| 4.4.1 Hela细胞划痕培养 | 第62-63页 |
| 4.4.2 MTT法检测Hela细胞的增殖 | 第63页 |
| 4.4.3 qPCR检测细胞周期基因的表达 | 第63-64页 |
| 4.5 讨论 | 第64-67页 |
| 小结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 攻读硕士学位期间取得学术成果 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
