| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 口蹄疫病毒 | 第12页 |
| 1.2 口蹄疫疫苗研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 弱毒疫苗 | 第12页 |
| 1.2.2 灭活疫苗 | 第12-13页 |
| 1.2.3 蛋白质疫苗与合成肽疫苗 | 第13页 |
| 1.2.4 DNA疫苗 | 第13页 |
| 1.3 FMDV VLPs的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 天然FMDV衣壳蛋白的组装 | 第14页 |
| 1.3.2 嵌合VLPs在抗口蹄疫中的研究 | 第14页 |
| 1.3.3 FMDV自身VLPs在抗口蹄疫中的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.4 影响FMDV VLPs产生的因素 | 第15-17页 |
| 1.4 总结与展望 | 第17-18页 |
| 第二章 FMDV AF72株衣壳蛋白P12A与蛋白酶 3C基因的克隆与分析 | 第18-28页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 FMDV AF/72株RNA的提取 | 第18页 |
| 2.2.2 初始引物的合成与克隆 | 第18-21页 |
| 2.2.3 特异性引物的设计合成与特异性目的基因的克隆 | 第21-23页 |
| 2.3 试验结果 | 第23-26页 |
| 2.3.1 P12A和 3C长片段基因的RT-PCR | 第23页 |
| 2.3.2 P12A和 3C长片段基因的克隆与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.3 特异性P12A与 3C基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.4 P12A和 3C特异性片段的克隆及鉴定 | 第25-26页 |
| 2.4 P12A和 3C基因序列分析 | 第26-27页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第27-28页 |
| 第三章 FMDV AF/72株VLPS的表达与组装研究 | 第28-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-36页 |
| 3.2.1 重组转移载体PFASTBAC? HTB-P12A3C的构建 | 第29-32页 |
| 3.2.2 重组转移载体PFASTBAC? DUAL-P12A3C的构建 | 第32页 |
| 3.2.3 E.COLI DH10 BAC感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 3.2.4 重组质粒转化至E.coli DH10 Bac感受态细胞 | 第32页 |
| 3.2.5 重组杆状病毒质粒的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.6 重组杆状病毒质粒的PCR鉴定 | 第33页 |
| 3.2.7 Sf9细胞的复苏与培养 | 第33-34页 |
| 3.2.8 重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞 | 第34页 |
| 3.2.9 P1代毒株的扩增 | 第34页 |
| 3.2.10 P3代毒株的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.11 重组蛋白的间接免疫荧光检测 | 第35页 |
| 3.2.12 重组蛋白的Western-blot检测 | 第35页 |
| 3.2.13 蔗糖密度梯度离心纯化 | 第35页 |
| 3.2.14 电镜观察 | 第35-36页 |
| 3.3 试验结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 P12A基因的双酶切 | 第36页 |
| 3.3.2 重组杆粒pFastBac? HTB-P12A与pFastBac? Dual-P12A的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.3 3C 基因的双酶切 | 第37-38页 |
| 3.3.4 重组杆粒pFastBac? HTB-P12A3C与pFastBac? Dual-P12A3C的构建及鉴定 | 第38页 |
| 3.3.5 重组杆粒Bacmid-HTB-P12A3C与Bacmid-Dual-P12A3C的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.6 重组杆粒转染 Sf9 细胞及 PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.7 间接免疫荧光分析 | 第40-41页 |
| 3.3.8 Western-blot检测 | 第41-42页 |
| 3.3.9 目的蛋白的电镜观察 | 第42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-44页 |
| 第四章 FMDV AF/72株VLPs或中间体的免疫原性分析 | 第44-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第44页 |
| 4.1.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-45页 |
| 4.2.1 疫苗的制备 | 第44页 |
| 4.2.2 动物免疫 | 第44-45页 |
| 4.2.3 豚鼠采血 | 第45页 |
| 4.2.4 抗FMDV特异性抗体的检测 | 第45页 |
| 4.2.5 微量中和抗体检测 | 第45页 |
| 4.2.6 细胞因子的检测 | 第45页 |
| 4.2.7 动物保护试验 | 第45页 |
| 4.3 试验结果 | 第45-48页 |
| 4.3.1 抗口蹄疫病毒特异性血清抗体水平 | 第45-46页 |
| 4.3.2 微量中和抗体的检测 | 第46-47页 |
| 4.3.3 细胞因子的检测 | 第47页 |
| 4.3.4 动物保护试验 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第48-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
