| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-38页 |
| 1.1 肺癌 | 第18-19页 |
| 1.1.1 简介 | 第18-19页 |
| 1.2 肿瘤的治疗 | 第19-21页 |
| 1.2.1 简介 | 第19页 |
| 1.2.2 辅助治疗 | 第19页 |
| 1.2.3 化疗 | 第19页 |
| 1.2.4 放射治疗 | 第19-20页 |
| 1.2.5 分子靶向治疗 | 第20页 |
| 1.2.6 免疫疗法在NSCLC中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3 Raf-MEK-ERK在肿瘤中的作用 | 第21-27页 |
| 1.3.1 Raf激酶 | 第22-23页 |
| 1.3.2 Raf激酶信号通路 | 第23-25页 |
| 1.3.3 Raf激酶结构 | 第25页 |
| 1.3.4 Raf激酶活性的调节 | 第25-26页 |
| 1.3.5 c-Raf调控 | 第26页 |
| 1.3.6 激酶活性需要Raf二聚体的形成 | 第26-27页 |
| 1.3.7 Raf激酶结合蛋白与肿瘤治疗 | 第27页 |
| 1.4 KAP1 | 第27-36页 |
| 1.4.1 简介 | 第27-28页 |
| 1.4.2 KAP1蛋白结构 | 第28-30页 |
| 1.4.3 KAP1的转录功能 | 第30-32页 |
| 1.4.4 KAP1的非转录功能 | 第32-34页 |
| 1.4.5 KAP1在细胞生理学中的意义 | 第34-35页 |
| 1.4.6 KAP1与肿瘤治疗 | 第35-36页 |
| 1.5 本论文的研究意义 | 第36-38页 |
| 第二章 用免疫沉淀法(co-IP)和蛋白组学的方法系统识别c-Raf激酶的结合蛋白 | 第38-52页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第38-48页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 2.1.2 实验仪器设备 | 第41-43页 |
| 2.1.3 实验试剂配方 | 第43-44页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第44-48页 |
| 2.2 实验结果 | 第48-49页 |
| 2.2.1 质谱结果 | 第48-49页 |
| 2.2.2 Western blot检测KAP1 | 第49页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 构建pcDNA3.1-KAP1质粒及稳定细胞系的构建 | 第52-74页 |
| 3.1 实验材料及方法 | 第52-66页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第53-66页 |
| 3.2 实验结果 | 第66-71页 |
| 3.2.1 琼脂糖凝胶电泳验证细胞总RNA提取 | 第66页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物 | 第66-67页 |
| 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳验证酶切产物 | 第67页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳验证胶回收产物 | 第67-68页 |
| 3.2.5 菌落PCR验证 | 第68-69页 |
| 3.2.6 测序结果比对 | 第69-70页 |
| 3.2.7 KAP1稳定细胞系验证 | 第70-71页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 构建px459-KAP1敲除质粒及稳定细胞系 | 第74-90页 |
| 4.1 实验内容 | 第74-76页 |
| 4.1.1 实验原理 | 第74页 |
| 4.1.2 实验目的 | 第74-75页 |
| 4.1.3 实验流程 | 第75-76页 |
| 4.2 实验材料 | 第76-77页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第76页 |
| 4.2.2 实验细胞、菌株及质粒 | 第76-77页 |
| 4.3 Crisp Cas9基因敲除实验方案 | 第77-82页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第77-80页 |
| 4.3.2 敲除细胞系CruiserTM酶验证 | 第80-82页 |
| 4.4 实验结果 | 第82-89页 |
| 4.4.1 测序结果比对 | 第82-83页 |
| 4.4.2 western blot检测A549-px459-KAP1稳定细胞系 | 第83-85页 |
| 4.4.3 CruiserTM酶切结果表明敲除细胞构建正确 | 第85-86页 |
| 4.4.4 基因组水平验证A549-px459-KAP1敲除细胞 | 第86-89页 |
| 4.5 小节与讨论 | 第89-90页 |
| 第五章 KAP1蛋白在肺癌中的表达 | 第90-94页 |
| 5.1 实验内容 | 第90页 |
| 5.2 实验材料 | 第90页 |
| 5.2.1 实验用组织样品 | 第90页 |
| 5.2.2 实验器材及试剂 | 第90页 |
| 5.3 实验结果 | 第90-92页 |
| 5.3.1 KAP1在不同类型肺癌中的表达 | 第90-91页 |
| 5.3.2 western blot验证肺癌标本中KAP1的表达情况 | 第91-92页 |
| 5.4 小结 | 第92-94页 |
| 第六章 KAP1蛋白在肺癌A549中的作用 | 第94-120页 |
| 6.1 实验内容 | 第94页 |
| 6.2 实验材料 | 第94-95页 |
| 6.3 实验方法 | 第95-101页 |
| 细胞增殖实验 | 第95-96页 |
| 检测细胞的药物敏感性 | 第96-97页 |
| 划痕实验 | 第97-98页 |
| Transwell小室实验 | 第98页 |
| 细胞成球实验 | 第98-99页 |
| 软琼脂克隆形成 | 第99-100页 |
| 血管形成 | 第100页 |
| EMT实验 | 第100-101页 |
| 流式细胞术周期测定 | 第101页 |
| 裸鼠移植瘤 | 第101页 |
| 6.4 实验结果 | 第101-118页 |
| 6.4.1 CCK8检测细胞增殖 | 第101-102页 |
| 6.4.2 CCK8检测化疗药物敏感实验 | 第102-107页 |
| 6.4.3 划痕实验 | 第107-109页 |
| 6.4.4 transwell实验 | 第109-110页 |
| 6.4.5 成球实验 | 第110-112页 |
| 6.4.6 软琼脂克隆形成实验 | 第112-113页 |
| 6.4.7 血管形成实验 | 第113-114页 |
| 6.4.8 EMT实验 | 第114-115页 |
| 6.4.9 流式细胞术检测细胞周期实验 | 第115-116页 |
| 6.4.10 裸鼠移植瘤试验 | 第116-118页 |
| 6.5 小结 | 第118-120页 |
| 第七章 总结与讨论 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录A | 第136页 |
