| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩写词 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| 1. 木本植物成花的影响因素 | 第14-17页 |
| 1.1 木本植物成花的环境调控 | 第14-16页 |
| 1.1.1 低温 | 第15页 |
| 1.1.2 水分 | 第15页 |
| 1.1.3 光照 | 第15页 |
| 1.1.4 生产措施 | 第15-16页 |
| 1.2 营养生长与生殖生长 | 第16页 |
| 1.3 木本植物成花的分子调控 | 第16-17页 |
| 2. 木本植物成花基因研究进展 | 第17-21页 |
| 2.1 CO基因 | 第17-18页 |
| 2.2 FLC基因 | 第18-19页 |
| 2.3 FT与TFL1基因 | 第19-20页 |
| 2.4 花分生组织特性基因LFY、AP1和SOC1 | 第20-21页 |
| 3. 植物SVP基因研究进展 | 第21-22页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 龙眼成花调控基因的表达 | 第23-35页 |
| 1. 试验材料 | 第23页 |
| 1.1 植物材料 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2. 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 总RNA的提取及纯化 | 第23-25页 |
| 2.1.1 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.2 RNA的检测 | 第24页 |
| 2.1.3 RNA的纯化 | 第24-25页 |
| 2.2 cDNA合成 | 第25页 |
| 2.3 龙眼开花途径相关基因的引物设计 | 第25-27页 |
| 2.4 荧光定量PCR反应 | 第27-28页 |
| 3. 结果与分析 | 第28-33页 |
| 3.1 RNA质量检测 | 第28页 |
| 3.2 绘制标准曲线 | 第28-30页 |
| 3.3 13个成花调控基因在‘立冬本’和‘四季蜜’嫁接新梢中的表达 | 第30-33页 |
| 4. 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 龙眼SVP基因的克隆与表达分析 | 第35-55页 |
| 1. 试验材料 | 第35-36页 |
| 1.1 植物材料 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 1.3 感受态和克隆载体 | 第35-36页 |
| 1.4 引物合成及测序 | 第36页 |
| 1.5 试验仪器 | 第36页 |
| 2. 试验方法 | 第36-39页 |
| 2.1 ‘红核子’和‘四季蜜’龙眼的RNA提取与纯化 | 第36页 |
| 2.1.1 总RNA的提取与纯化 | 第36页 |
| 2.1.2 RNA的检测 | 第36页 |
| 2.2 cDNA的合成 | 第36-37页 |
| 2.3 引物设计与合成 | 第37页 |
| 2.4 SVP基因片段的PCR扩增 | 第37页 |
| 2.5 目的片段的回收 | 第37-38页 |
| 2.6 载体与目的片段的连接 | 第38页 |
| 2.7 产物的连接及转化 | 第38页 |
| 2.8 测序及结果分析 | 第38-39页 |
| 2.9 ‘红核子’龙眼SVP基因的表达分析 | 第39页 |
| 2.9.1 ‘红核子’龙眼RNA的提取及纯化 | 第39页 |
| 2.9.2 RNA的检测 | 第39页 |
| 2.9.3 ‘红核子’龙眼SVP基因的表达分析 | 第39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-52页 |
| 3.1 ‘四季蜜’与‘红核子’龙眼RNA的提取 | 第39页 |
| 3.2 SVP基因的克隆 | 第39-50页 |
| 3.2.1 SVP645基因的cDNA克隆 | 第39-47页 |
| 3.2.2 SVP2719 基因 cDNA 的克隆 | 第47-50页 |
| 3.3 龙眼SVP基因在花芽分化过程的表述 | 第50-52页 |
| 3.3.1 ‘红核子’龙眼RNA的提取及纯化 | 第50-51页 |
| 3.3.2 龙眼SVP645基因的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 龙眼SVP2719基因的表达 | 第52页 |
| 4. 讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 龙眼SVP2719基因植物表达载体构建及转化烟草 | 第55-73页 |
| 1. 材料和仪器 | 第55-56页 |
| 1.1 材料 | 第55页 |
| 1.2 根癌农杆菌及载体 | 第55页 |
| 1.3 试验仪器与试剂 | 第55页 |
| 1.4 培养基与培养条件 | 第55-56页 |
| 2. 试验方法 | 第56-59页 |
| 2.1 龙眼SVP2719基因(带有5’端UTR序列)的克隆 | 第56页 |
| 2.2 龙眼SVP2719基因表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 2.2.1 龙眼SVP2719基因与表达载体质粒提取 | 第56-57页 |
| 2.2.2 龙眼SVP2719基因与表达载体质粒酶切 | 第57-58页 |
| 2.3 龙眼SVP2719基因与表达载体的连接 | 第58页 |
| 2.4 龙眼SVP2719基因重组质粒转化大肠杆菌 | 第58-59页 |
| 2.5 龙眼SVP2719基因重组质粒的验证 | 第59页 |
| 2.5.1 PCR鉴定 | 第59页 |
| 2.5.2 双酶切鉴定 | 第59页 |
| 3. 龙眼SVP2719基因重组质粒转化根癌农杆菌 | 第59-60页 |
| 3.1 龙眼SVP2719基因重组质粒的提取 | 第59页 |
| 3.2 根癌农杆菌EHA105的活化及感受态细胞制备 | 第59-60页 |
| 3.2.1 根癌农杆菌的活化 | 第59页 |
| 3.2.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第59-60页 |
| 3.3 龙眼SVP2719基因重组质粒转化EHA105 | 第60页 |
| 3.4 龙眼SVP2719基因重组质粒转化EHA105验证 | 第60页 |
| 3.4.1 PCR鉴定 | 第60页 |
| 3.4.2 双酶切鉴定 | 第60页 |
| 4. 根癌农杆菌介导的SVP2719基因转化本氏烟草 | 第60-61页 |
| 4.1 烟草的播种及外植体预培养 | 第60-61页 |
| 4.2 烟草外植体的转化 | 第61页 |
| 4.3 烟草抗性芽的筛选 | 第61页 |
| 4.4 抗性芽的生根培养 | 第61页 |
| 4.5 抗性植株炼苗及移栽 | 第61页 |
| 5. 烟草抗性植株的分子鉴定 | 第61-63页 |
| 5.1 烟草抗性植株DNA及RNA的提取 | 第61-63页 |
| 5.1.1 DNA的提取 | 第61-62页 |
| 5.1.2 RNA的提取 | 第62-63页 |
| 5.2 DNA鉴定 | 第63页 |
| 5.3 半定量检测 | 第63页 |
| 5.4 荧光定量PCR检测 | 第63页 |
| 6. 结果与分析 | 第63-70页 |
| 6.1 龙眼SVP2719基因植物表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 6.2 龙眼SVP2719基因重组载体转化根癌农杆菌 | 第64-65页 |
| 6.3 根癌农杆菌介导的SVP2719基因转化本氏烟草 | 第65-66页 |
| 6.4 烟草抗性植株的分子鉴定 | 第66-68页 |
| 6.4.1 DNA鉴定 | 第66-67页 |
| 6.4.2 半定量PCR检测 | 第67-68页 |
| 6.4.3 荧光定量PCR检测 | 第68页 |
| 6.5 转基因烟草性状观察 | 第68-70页 |
| 7. 讨论 | 第70-73页 |
| 第五章 总结与展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
