| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写索引 | 第15-17页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一章 综述 | 第19-31页 |
| 1.1 肝癌的现状 | 第19-21页 |
| 1.1.1 肝脏移植手术治疗 | 第19-20页 |
| 1.1.2 药物治疗 | 第20-21页 |
| 1.1.3 姑息性治疗 | 第21页 |
| 1.1.4 中药治疗 | 第21页 |
| 1.2 直接重编程的现状 | 第21-26页 |
| 1.2.1 ES/i PS细胞 | 第22-24页 |
| 1.2.2 间充质干细胞(MSCs) | 第24页 |
| 1.2.3 肝脏的直接重编程研究 | 第24-26页 |
| 1.3 纳米载体发展与现状 | 第26-29页 |
| 1.3.1 磁性氧化铁纳米粒 | 第27-28页 |
| 1.3.2 碳酸钙纳米粒 | 第28页 |
| 1.3.3 多糖纳米载体 | 第28-29页 |
| 1.3.4 磷酸钙纳米粒 | 第29页 |
| 1.4 本文的研究目的与内容 | 第29-31页 |
| 第二章 磷酸钙-质粒纳米粒的制备 | 第31-42页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 质粒的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.2 质粒-磷酸钙纳米粒的制备 | 第33-35页 |
| 2.3 Cap-p DNA纳米粒的表征 | 第35-36页 |
| 2.3.1 电泳 | 第35页 |
| 2.3.2 粒径分布及zeta电位的测定 | 第35页 |
| 2.3.3 形态的观察 | 第35页 |
| 2.3.4 MTT法检测磷酸钙纳米粒的毒性试验 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果及讨论 | 第36-40页 |
| 2.4.1 电泳结果 | 第36-37页 |
| 2.4.2 Cap-p DNA纳米粒的Zeta电位及粒径分布的测定结果 | 第37-39页 |
| 2.4.3 透射电镜结果 | 第39-40页 |
| 2.4.4 Cap-p DNA的细胞毒性结果 | 第40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）直接重编程及其鉴定 | 第42-58页 |
| 3.1 材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2 UC-MSCs的体外直接重编程 | 第43-46页 |
| 3.2.1 UC-MSCs的培养 | 第43-44页 |
| 3.2.2 UC-MSCs的体外直接诱导分化成肝脏样细胞 | 第44-46页 |
| 3.3 UC-MSCs直接重编程为肝脏样细胞的方法学筛选 | 第46-48页 |
| 3.3.1 ELISA法测定AFP和ALB的含量 | 第46-47页 |
| 3.3.2 免疫荧光法检测AFP、ALB、CK18的表达 | 第47-48页 |
| 3.4 UC-MSCs体外直接重编程的结果及讨论 | 第48-55页 |
| 3.4.1 质粒的筛选 | 第48-50页 |
| 3.4.2 肝脏相关蛋白的表达趋势及培养基的筛选 | 第50-52页 |
| 3.4.3 细胞的形态变化 | 第52-54页 |
| 3.4.4 直接重编程肝脏样细胞的免疫荧光 | 第54-55页 |
| 3.4.5 统计学分析 | 第55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-58页 |
| 第四章 大鼠胚胎成纤维细胞（REF）和小鼠神经脊来源的间充质干细胞（EMSC）的方法学验证 | 第58-75页 |
| 4.1 材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第59页 |
| 4.2 REF和EMSC细胞的体外直接重编程 | 第59-60页 |
| 4.2.1 细胞转染 | 第59页 |
| 4.2.2 细胞的体外诱导分化培养 | 第59-60页 |
| 4.3 体外直接重编程为肝脏样细胞的鉴定 | 第60-64页 |
| 4.3.1 细胞形态的变化 | 第60页 |
| 4.3.2 Western blot检测 | 第60-62页 |
| 4.3.3 细胞免疫荧光检测 | 第62页 |
| 4.3.4 合成尿素含量的测定 | 第62-63页 |
| 4.3.5 葡萄糖消耗量的测定 | 第63-64页 |
| 4.3.6 酶活性检测 | 第64页 |
| 4.3.7 统计学分析 | 第64页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第64-73页 |
| 4.4.1 形态学 | 第64-66页 |
| 4.4.2 Western Blot检测AFP，ALB以及CK18的表达 | 第66-67页 |
| 4.4.3 免疫荧光检测AFP，ALB以及CK18的表达 | 第67-69页 |
| 4.4.4 合成尿素的检测 | 第69-70页 |
| 4.4.5 消耗葡萄糖的检测 | 第70-71页 |
| 4.4.6 酶活性的检测 | 第71-72页 |
| 4.4.7 统计学分析 | 第72-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 3D体系下，EMSC的体外肝脏样细胞的诱导分化 | 第75-87页 |
| 5.1 材料 | 第75-76页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第75页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第76页 |
| 5.2 实验方法 | 第76-77页 |
| 5.2.1 胶原纤维以及交联胶原纤维和壳聚糖的 3D支架的制备 | 第76-77页 |
| 5.2.2 EMSC在 3D支架上的直接重编程 | 第77页 |
| 5.3 EMSC在 3D体系下的鉴定结果及讨论 | 第77-86页 |
| 5.3.1 3D支架的表征 | 第77-79页 |
| 5.3.2 EMSC在 3D支架上的生长状态 | 第79-80页 |
| 5.3.3 EMSC在 3D支架上的细胞活力 | 第80-81页 |
| 5.3.4 EMSC在 3D支架上的相关蛋白（AFP/ALB）的表达 | 第81-82页 |
| 5.3.5 EMSC在 3D支架下的尿素的合成 | 第82-83页 |
| 5.3.6 3D支架上，EMSC葡萄糖的消耗量 | 第83页 |
| 5.3.7 EMSC在 3D支架上，ALT的酶活性 | 第83-84页 |
| 5.3.8 EMSC在2种培养体系下的比较 | 第84-85页 |
| 5.3.9 统计学分析 | 第85-86页 |
| 5.4 本章小结 | 第86-87页 |
| 全文总结 | 第87-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读硕士期间已发表或完成的论文 | 第99页 |
