| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 糖代谢 | 第11-12页 |
| 1.2 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)和相关的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶催化反应 | 第12-13页 |
| 1.2.2 UGPase是植物生长中重要的限速酶 | 第13-14页 |
| 1.2.3 UGPase的同工酶和拷贝数 | 第14-15页 |
| 1.2.4 UGPase和相关蛋白的进化 | 第15-16页 |
| 1.2.5 UGPase动力学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.6 UGPase的体内调控 | 第17页 |
| 1.2.7 UGPase组织和亚细胞定位 | 第17-18页 |
| 1.2.8 UGPase三维结构 | 第18-20页 |
| 1.3 本实验的研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料和方法 | 第22-40页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 酶与试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.4 主要的化学试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要的抗生素 | 第23页 |
| 2.1.6 主要的分析软件 | 第23页 |
| 2.1.7 主要的仪器 | 第23页 |
| 2.2. 胡杨/灰杨愈伤组织和新鲜叶片组织总RNA的提取 | 第23-26页 |
| 2.2.1. CTAB法RNA提取法所需溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.2 RNA提取步骤 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RNA提取过程中需要注意的事项 | 第25页 |
| 2.2.4 用琼脂糖电泳检测RNA的质量 | 第25页 |
| 2.2.5 测定RNA的浓度 | 第25-26页 |
| 2.3 用RT-PCR的方法获得胡杨灰杨UGP基因家族的cDNA全长 | 第26-31页 |
| 2.3.1 用反转录酶反转录RNA得到cDNA | 第26页 |
| 2.3.2 扩增基因全长的PCR反应 | 第26-29页 |
| 2.3.3 对PCR产物进行切胶回收 | 第29页 |
| 2.3.4 目的基因的cDNA与克隆载体pMD19-T的连接 | 第29-30页 |
| 2.3.5 大肠杆菌DH5α的带有目的基因的pMD19-T载体质粒转化： | 第30页 |
| 2.3.6 阳性克隆的鉴定和送测 | 第30-31页 |
| 2.4 UGP3Y_1和UGP3W单倍型原核表达体系的构建 | 第31-35页 |
| 2.4.1 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.4.2 目的基因和pET28a表达载体的双酶切 | 第32页 |
| 2.4.3 目的基因与pET28a表达载体的连接 | 第32页 |
| 2.4.4 重组质粒的转化、阳性克隆的鉴定和送测 | 第32-33页 |
| 2.4.5 原核表达系统中目的蛋白的条件优化 | 第33页 |
| 2.4.6 诱导的蛋白样品的SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 2.4.7 大量靶基因的诱导表达 | 第34页 |
| 2.4.8 制备细胞抽提液 | 第34页 |
| 2.4.9 用Ni-NTA纯化目的蛋白 | 第34-35页 |
| 2.5 用Western blotting检测胡杨根茎叶中的UGPase蛋白 | 第35-37页 |
| 2.5.1 用丙酮沉淀法提取胡杨根茎叶总蛋白 | 第35页 |
| 2.5.2 Western blotting检测胡杨根茎叶中的UGPase蛋白 | 第35-37页 |
| 2.6 胡杨扦插幼苗的盐处理 | 第37页 |
| 2.7 荧光实时定量RT-PCR(SYBR Green法) | 第37-40页 |
| 2.7.1 反转录 | 第37-38页 |
| 2.7.2 用Rotor Gene 3000 PCR扩增仪进行荧光实时定量的步骤 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-57页 |
| 3.1 实验材料总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.2 胡杨灰杨UGP基因家族的编码区全长的扩增和分析 | 第40-45页 |
| 3.2.1 阳性克隆的菌检胶图 | 第40-41页 |
| 3.2.2 胡杨/灰杨UGP基因家族编码区序列比对 | 第41-45页 |
| 3.3 UGP3原核表达体系的构建和蛋白的诱导表达 | 第45-47页 |
| 3.3.1：表达载体和目的基因质粒的双酶切 | 第45-46页 |
| 3.3.2 UGP3Y_1和UGP3Y_2单倍型的异源表达 | 第46-47页 |
| 3.4 Western blotting检测胡杨根茎叶中的UGPase蛋白 | 第47-48页 |
| 3.5 UGP3三个单倍型的保守结构和三维结构的模拟分析 | 第48-52页 |
| 3.5.1 UGP3的保守结构 | 第48页 |
| 3.5.2 UGP3Y_1/UGP3Y_2/UGP3W蛋白三维结构的模拟 | 第48-52页 |
| 3.6 胡杨UGPase基因家族的时空表达 | 第52页 |
| 3.7 盐处理的胡杨幼苗中UGP基因家族荧光实时定量RT-PCR结果 | 第52-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.2 胡杨灰杨UGPase基因家族的扩增与进化分析 | 第57-58页 |
| 4.3 UGPase基因家族的功能分析 | 第58-59页 |
| 4.4 UGPase基因家族Real-time PCR结果分析 | 第59-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 在读期间参与学术成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
