摘要 | 第5-6页 |
ABSTRACT | 第6页 |
第一章 文献综述 猪单克隆非特异抑制因子(p MNSFβ)基因功能的研究进展 | 第9-19页 |
1.1 泛素样蛋白概述 | 第9-11页 |
1.2 细胞凋亡 | 第11-13页 |
1.2.1 细胞凋亡机制的研究进展 | 第11-12页 |
1.2.2 BCL‐G蛋白与细胞凋亡 | 第12-13页 |
1.3 MNSFβ 基因的研究进展 | 第13-18页 |
1.3.1 MNSFβ 基因的发现背景及结构特点 | 第13-14页 |
1.3.2 MNSFβ 的表达分布及其定位 | 第14页 |
1.3.3 MNSFβ 基因的功能 | 第14-17页 |
1.3.4 MNSFβ 在母‐胎界面免疫调节中的作用 | 第17-18页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
第二章 稳定表达猪MNSFβ 蛋白细胞株的建立 | 第19-24页 |
2.1 材料 | 第19-20页 |
2.1.1 细胞株和载体 | 第19页 |
2.1.2 主要试剂耗材 | 第19-20页 |
2.1.3 主要仪器 | 第20页 |
2.2 方法 | 第20-21页 |
2.2.1 无内毒素重组载体的提取 | 第20页 |
2.2.2 细胞转染 | 第20页 |
2.2.3 G418对SUVEC细胞最佳筛选浓度的确定 | 第20页 |
2.2.4 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的筛选 | 第20页 |
2.2.5 Western blot检测稳定表达GFP‐p MNSFβ 细胞株稳定性 | 第20-21页 |
2.3 结果 | 第21-23页 |
2.3.1 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的荧光鉴定 | 第21-22页 |
2.3.2 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的稳定性检测 | 第22-23页 |
2.4 讨论 | 第23页 |
2.5 小结 | 第23-24页 |
第三章 猪MNSFβ 蛋白与猪BCL-G蛋白的相互作用研究 | 第24-33页 |
3.1 材料 | 第24-25页 |
3.1.1 细胞、载体和菌种 | 第24页 |
3.1.2 主要试剂耗材 | 第24页 |
3.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
3.2 方法 | 第25-28页 |
3.2.1 真核表达载体p CMV‐HA‐MNSFβ 的构建 | 第25-27页 |
3.2.2 间接免疫荧光检测myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达 | 第27-28页 |
3.2.3 myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达鉴定 | 第28页 |
3.2.4 p BCL‐G与p MNSFβ 蛋白相互作用的免疫共沉淀试验 | 第28页 |
3.3 结果 | 第28-31页 |
3.3.1 p MNSFβ 基因真核表达载体的鉴定 | 第28-29页 |
3.3.2 间接免疫荧光检测myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达 | 第29-31页 |
3.3.3 p BCL‐G能够与p MNSFβ 蛋白相互作用 | 第31页 |
3.4 讨论 | 第31-32页 |
3.5 小结 | 第32-33页 |
第四章 猪MNSFβ 与BCL-G相互作用对STS诱导的细胞凋亡的协同促进作用 | 第33-40页 |
4.1 材料 | 第33-34页 |
4.1.1 细胞与载体 | 第33页 |
4.1.2 主要试剂耗材 | 第33-34页 |
4.1.3 主要仪器 | 第34页 |
4.2 方法 | 第34-35页 |
4.2.1 用STS对稳定表达p MNSFβ 的SUVEC细胞进行诱导 | 第34页 |
4.2.2 细胞形态学观察和Hoechst 33342染色 | 第34页 |
4.2.3 STS诱导的稳定过表达p MNSFβ 蛋白的SUVEC细胞凋亡检测 | 第34页 |
4.2.4 STS诱导的共表达p MNSFβ 和p BCL‐G蛋白的SUVEC细胞凋亡检测 | 第34-35页 |
4.2.5 统计学分析 | 第35页 |
4.3 结果 | 第35-38页 |
4.3.1 STS诱导对过表达p MNSFβ 蛋白的细胞形态学的影响 | 第35页 |
4.3.2 p MNSFβ 蛋白能够促进STS诱导的SUVEC细胞凋亡 | 第35-37页 |
4.3.3 p MNSFβ 和p BCL‐G蛋白能够协同促进STS诱导的细胞凋亡 | 第37-38页 |
4.4 讨论 | 第38-39页 |
4.5 小结 | 第39-40页 |
结论与创新点 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-47页 |
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index) | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |
作者简介 | 第49页 |