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猪MNSFβ稳定表达细胞系的建立及促凋亡功能研究

摘要第5-6页
ABSTRACT第6页
第一章 文献综述 猪单克隆非特异抑制因子(p MNSFβ)基因功能的研究进展第9-19页
    1.1 泛素样蛋白概述第9-11页
    1.2 细胞凋亡第11-13页
        1.2.1 细胞凋亡机制的研究进展第11-12页
        1.2.2 BCL‐G蛋白与细胞凋亡第12-13页
    1.3 MNSFβ 基因的研究进展第13-18页
        1.3.1 MNSFβ 基因的发现背景及结构特点第13-14页
        1.3.2 MNSFβ 的表达分布及其定位第14页
        1.3.3 MNSFβ 基因的功能第14-17页
        1.3.4 MNSFβ 在母‐胎界面免疫调节中的作用第17-18页
    1.4 本研究的目的和意义第18-19页
第二章 稳定表达猪MNSFβ 蛋白细胞株的建立第19-24页
    2.1 材料第19-20页
        2.1.1 细胞株和载体第19页
        2.1.2 主要试剂耗材第19-20页
        2.1.3 主要仪器第20页
    2.2 方法第20-21页
        2.2.1 无内毒素重组载体的提取第20页
        2.2.2 细胞转染第20页
        2.2.3 G418对SUVEC细胞最佳筛选浓度的确定第20页
        2.2.4 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的筛选第20页
        2.2.5 Western blot检测稳定表达GFP‐p MNSFβ 细胞株稳定性第20-21页
    2.3 结果第21-23页
        2.3.1 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的荧光鉴定第21-22页
        2.3.2 稳定表达GFP‐p MNSFβ 蛋白细胞株的稳定性检测第22-23页
    2.4 讨论第23页
    2.5 小结第23-24页
第三章 猪MNSFβ 蛋白与猪BCL-G蛋白的相互作用研究第24-33页
    3.1 材料第24-25页
        3.1.1 细胞、载体和菌种第24页
        3.1.2 主要试剂耗材第24页
        3.1.3 主要仪器第24-25页
    3.2 方法第25-28页
        3.2.1 真核表达载体p CMV‐HA‐MNSFβ 的构建第25-27页
        3.2.2 间接免疫荧光检测myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达第27-28页
        3.2.3 myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达鉴定第28页
        3.2.4 p BCL‐G与p MNSFβ 蛋白相互作用的免疫共沉淀试验第28页
    3.3 结果第28-31页
        3.3.1 p MNSFβ 基因真核表达载体的鉴定第28-29页
        3.3.2 间接免疫荧光检测myc‐p BCL‐G和HA‐p MNSFβ 融合蛋白在真核细胞中的表达第29-31页
        3.3.3 p BCL‐G能够与p MNSFβ 蛋白相互作用第31页
    3.4 讨论第31-32页
    3.5 小结第32-33页
第四章 猪MNSFβ 与BCL-G相互作用对STS诱导的细胞凋亡的协同促进作用第33-40页
    4.1 材料第33-34页
        4.1.1 细胞与载体第33页
        4.1.2 主要试剂耗材第33-34页
        4.1.3 主要仪器第34页
    4.2 方法第34-35页
        4.2.1 用STS对稳定表达p MNSFβ 的SUVEC细胞进行诱导第34页
        4.2.2 细胞形态学观察和Hoechst 33342染色第34页
        4.2.3 STS诱导的稳定过表达p MNSFβ 蛋白的SUVEC细胞凋亡检测第34页
        4.2.4 STS诱导的共表达p MNSFβ 和p BCL‐G蛋白的SUVEC细胞凋亡检测第34-35页
        4.2.5 统计学分析第35页
    4.3 结果第35-38页
        4.3.1 STS诱导对过表达p MNSFβ 蛋白的细胞形态学的影响第35页
        4.3.2 p MNSFβ 蛋白能够促进STS诱导的SUVEC细胞凋亡第35-37页
        4.3.3 p MNSFβ 和p BCL‐G蛋白能够协同促进STS诱导的细胞凋亡第37-38页
    4.4 讨论第38-39页
    4.5 小结第39-40页
结论与创新点第40-41页
参考文献第41-47页
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index)第47-48页
致谢第48-49页
作者简介第49页

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