| 致谢 | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-12页 |
| 中文摘要 | 第12-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 论文创新点 | 第20-21页 |
| 缩略词表 | 第21-28页 |
| 1. Junctophilin 3调控胰岛β细胞胰岛素分泌功能研究 | 第28-62页 |
| 引言 | 第28-30页 |
| 1.1 仪器和试剂 | 第30-32页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第30页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.1.4 常用溶液及主要试剂配制 | 第31-32页 |
| 1.2 实验方法 | 第32-39页 |
| 1.2.1 小鼠原代胰岛制备与培养 | 第32-33页 |
| 1.2.2 免疫荧光染色 | 第33页 |
| 1.2.3 Western Blot法检测蛋白表达 | 第33-34页 |
| 1.2.4 RT-PCR检测基因表达 | 第34-35页 |
| 1.2.5 ELISA法检测胰岛素释放 | 第35-36页 |
| 1.2.6 siRNA干扰 | 第36页 |
| 1.2.7 慢病毒过表达JP3 | 第36-37页 |
| 1.2.8 MTT法检测细胞活性 | 第37页 |
| 1.2.9 钙瞬变检测 | 第37页 |
| 1.2.10 胰岛ATP产量检测 | 第37页 |
| 1.2.11 透射电镜检测细胞结构 | 第37-38页 |
| 1.2.12 线粒体染料染色 | 第38页 |
| 1.2.13 冰冻切片 | 第38页 |
| 1.2.14 免疫共沉淀 | 第38页 |
| 1.2.15 统计方法 | 第38-39页 |
| 1.3 实验结果 | 第39-58页 |
| 1.3.1 JP3在胰岛β细胞中表达 | 第39-41页 |
| 1.3.2 JP3调节小鼠胰岛GSIS功能 | 第41-42页 |
| 1.3.3 JP3调节小鼠胰岛线粒体功能 | 第42-44页 |
| 1.3.4 JP3对小鼠胰岛细胞线粒体与内质网连接的影响 | 第44-45页 |
| 1.3.5 小鼠胰岛β细胞存在细胞膜-内质网-线粒体轴超微结构 | 第45-46页 |
| 1.3.6 JP3调节小鼠胰岛细胞Mfn2表达 | 第46-47页 |
| 1.3.7 Mfn2影响小鼠胰岛β细胞GSIS功能 | 第47-48页 |
| 1.3.8 JP3对Mfn2上游调节因子表达的调节 | 第48-49页 |
| 1.3.9 JP3调节小鼠胰岛RyR介导的胰岛素释放与ca~(2+)瞬变 | 第49-52页 |
| 1.3.10 JP3对Mfn2上游调节因子Pgc-1α核转移的调节 | 第52-54页 |
| 1.3.11 JP3对小鼠胰岛ca~(2+)内流相关蛋白表达及SOCE的影响 | 第54-55页 |
| 1.3.12 JP3缺失对小鼠胰岛内质网应激及凋亡早期信号的影响 | 第55-56页 |
| 1.3.13 JP3过表达对小鼠胰岛胰岛素释放,Ca~(2+)信号及Mfns的影响 | 第56-58页 |
| 1.4 讨论 | 第58-61页 |
| 1.5 结论 | 第61-62页 |
| 2. PPARβ激活促胰岛素阳性细胞分化机制研究(附) | 第62-96页 |
| 引言 | 第62-64页 |
| 2.1 仪器和试剂 | 第64-67页 |
| 2.1.1 细胞株与实验动物 | 第64页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第64-65页 |
| 2.1.4 常用溶液及主要试剂配制 | 第65-67页 |
| 2.2 实验方法 | 第67-74页 |
| 2.2.1 饲养层细胞制备 | 第67-68页 |
| 2.2.2 ES细胞常规培养 | 第68页 |
| 2.2.3 三步法实验流程分化小鼠ES细胞为INS~+细胞 | 第68-69页 |
| 2.2.4 人类ES细胞H9系分化为INS~+细胞 | 第69-70页 |
| 2.2.5 流式细胞术 | 第70页 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 | 第70页 |
| 2.2.7 shRNA干扰细胞 | 第70-71页 |
| 2.2.8 Western Blot法检测蛋白表达 | 第71页 |
| 2.2.9 ELISA法检测胰岛素释放 | 第71-72页 |
| 2.2.10 小鼠胚胎胰腺获取 | 第72页 |
| 2.2.11 原代小鼠胰岛制备 | 第72页 |
| 2.2.12 荧光定量PCR检测基因表达 | 第72-73页 |
| 2.2.13 统计方法 | 第73-74页 |
| 2.3 实验结果 | 第74-93页 |
| 2.3.1 小鼠ES细胞三步法实验流程分化为INS~+细胞 | 第74-75页 |
| 2.3.2 PPARs在小鼠INS~+细胞分化过程中的表达 | 第75-76页 |
| 2.3.3 PPARβ激活对INS~+细胞分化及GSIS功能的影响 | 第76-79页 |
| 2.3.4 PPARβ激活经由Pdx-1特异性促INS~+细胞分化 | 第79-81页 |
| 2.3.5 PPARβ激活对Foxol、Gsk3β及PI3K/Akt表达影响 | 第81-82页 |
| 2.3.6 Foxol对INS~+细胞分化与功能的影响 | 第82-84页 |
| 2.3.7 Gsk3β对INS~+细胞分化的影响 | 第84-85页 |
| 2.3.8 PI3K/Akt信号参与PPARβ激活诱导的INS~+细胞分化 | 第85-86页 |
| 2.3.9 PPARβ激活对Mfn2与Mafa与NeuroD1的影响 | 第86-88页 |
| 2.3.10 PPARα与PPARγ激活对INS~+功能及相关信号通路影响 | 第88-89页 |
| 2.3.11 人类ES细胞分化为INS~+细胞模型建立 | 第89-90页 |
| 2.3.12 人类ES细胞分化为INS~+细胞共享PPARβ激活信号通路 | 第90-93页 |
| 2.4 讨论 | 第93-95页 |
| 2.5 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 综述 | 第104-120页 |
| 参考文献 | 第112-120页 |
| 作者简历及在读期间取得的科研成果 | 第120-122页 |
