| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 真菌表观遗传调控 | 第11-15页 |
| 1.1.1 DNA甲基化 | 第11-12页 |
| 1.1.2 组蛋白修饰 | 第12-15页 |
| 1.2 基因敲除以及在真菌研究中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 RNA干扰在真菌研究中的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 本工作的研究目的和主要研究内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第17-18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第2章 敲除组蛋白H3赖氨酸甲基转移酶基因hkmt对里氏木霉表达纤维素酶的影响 | 第19-40页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂与培养基 | 第19-21页 |
| 2.1.3 仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 T. reesei QM9414基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 敲除表达盒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.3 Overlap法进行片段连接 | 第23-24页 |
| 2.2.4 T. reesei QM9414原生质体的制备及转化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 hkmt基因敲除转化子的筛选与验证 | 第25-26页 |
| 2.2.6 Southern blotting验证hkmt基因敲除转化子 | 第26-28页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR | 第28-30页 |
| 2.2.8 酶活测定（FPA和CMCA） | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-38页 |
| 2.3.1 组蛋白甲基转移酶基因敲除盒的构建 | 第30-32页 |
| 2.3.2 里氏木霉组蛋白甲基转移酶缺失转化子鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3.3 Southern blotting验证 | 第34页 |
| 2.3.4 里氏木霉出发株与组蛋白甲基转移酶缺失突变株的表型分析 | 第34-35页 |
| 2.3.5 组蛋白甲基转移酶缺失突变菌株的FPA和CMCA的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.6 qPCR分析组蛋白甲基转移酶缺失突变菌株的转录水平 | 第36-38页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第38-40页 |
| 2.4.1 基因敲除 | 第38页 |
| 2.4.2 抗性标记基因的选择 | 第38页 |
| 2.4.3 融合PCR | 第38-39页 |
| 2.4.4 里氏木霉 Δhkmt突变株的筛选 | 第39页 |
| 2.4.5 组蛋白甲基转移酶hkmt对里氏木霉表型的影响 | 第39页 |
| 2.4.6 里氏木霉 Δhkmt突变株的滤纸酶和CMC酶活以及转录水平分析 | 第39-40页 |
| 2.4.7 创新点 | 第40页 |
| 第3章 敲除组蛋白去乙酰化酶基因hdac对里氏木霉表达纤维素酶的影响 | 第40-52页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂与培养基 | 第40页 |
| 3.1.3 仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 T. reesei QM9414基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 3.2.2 敲除表达盒的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 Overlap法进行片段连接 | 第42页 |
| 3.2.4 T. reesei QM9414原生质体的制备及转化 | 第42页 |
| 3.2.5 hdac基因敲除转化子的筛选与验证 | 第42-43页 |
| 3.2.6 Southern blotting验证hkmt基因敲除转化子 | 第43页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR（RT-q PCR） | 第43页 |
| 3.2.8 酶活测定（滤纸酶活和CMC酶活） | 第43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-50页 |
| 3.3.1 组蛋白去乙酰化酶基因敲除盒的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.2 里氏木霉组蛋白去乙酰化酶缺失转化子鉴定 | 第44-46页 |
| 3.3.3 Southern blotting验证 | 第46页 |
| 3.3.4 里氏木霉出发株与组蛋白去乙酰化酶缺失突变株的表型分析 | 第46-47页 |
| 3.3.5 组蛋白去乙酰化酶缺失突变菌株的FPA和CMCA的测定 | 第47-48页 |
| 3.3.6 qPCR分析组蛋白去乙酰化酶缺失突变菌株的转录水平 | 第48-50页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第50-52页 |
| 3.4.1 组蛋白去乙酰化酶hdac对里氏木霉表型的影响 | 第50页 |
| 3.4.2 里氏木霉 Δhdac突变株的滤纸酶和CMC酶活以及转录水平 | 第50-51页 |
| 3.4.3 创新点 | 第51-52页 |
| 第4章 siRNA干扰组蛋白乙酰化酶基因gcn5对里氏木霉表达纤维素酶的影响 | 第52-69页 |
| 4.1 材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第52页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 培养基及相关溶液的配制 | 第52-53页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 T. reesei gcn5干扰重组质粒的构建以及鉴定 | 第53-56页 |
| 4.2.2 T. reesei QM9414基因组DNA的提取 | 第56页 |
| 4.2.3 T. reesei QM9414原生质体的制备及转化 | 第56页 |
| 4.2.4 gcn5干扰载体转化子的鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2.5 gcn5干扰重组菌对孢子与菌丝的影响 | 第57页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR | 第57页 |
| 4.2.7 酶活测定（滤纸酶活和CMC酶活） | 第57页 |
| 4.3 结果 | 第57-67页 |
| 4.3.1 gcn5-siRNA干扰载体的构建和鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.2 干扰重组菌的鉴定 | 第58-60页 |
| 4.3.3 gcn5干扰重组菌对孢子与菌丝的影响 | 第60-62页 |
| 4.3.4 gcn5干扰重组菌的FPA和CMCA测定 | 第62-63页 |
| 4.3.5 干扰重组菌转录水平的基因相对表达量分析 | 第63-66页 |
| 4.3.6 干扰重组菌中组蛋白去乙酰化转移酶基因hdac以及组蛋白H3甲基化转移酶基因hkmt相对表达量 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录A 英文缩略词 | 第78-79页 |
| 附录B 荧光定量PCR相关曲线 | 第79-81页 |
| 附录C 测序结果 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第86页 |
