| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第13-19页 |
| 绪论 | 第19-23页 |
| 1 第一章 乳酸对OA软骨细胞的作用及其机制 | 第23-56页 |
| 1.1 引言 | 第23-24页 |
| 1.2 实验试剂和仪器 | 第24-27页 |
| 1.2.1 材料和试剂 | 第24-26页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第26页 |
| 1.2.3 相关试剂的配制 | 第26-27页 |
| 1.3 实验方法 | 第27-38页 |
| 研究路线 | 第27-31页 |
| 技术方法 | 第31-38页 |
| 1.3.1 人软骨细胞的分离和培养 | 第31页 |
| 1.3.2 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 1.3.3 细胞复苏 | 第32页 |
| 1.3.4 总RNA提取 | 第32-33页 |
| 1.3.5 逆转录合成cDNA | 第33页 |
| 1.3.6 实时荧光定量PCR(Real time PCR) | 第33-34页 |
| 1.3.7 siRNA设计、转染步骤 | 第34-35页 |
| 1.3.8 细胞蛋白样品准备 | 第35-36页 |
| 1.3.9 Western-Blot | 第36页 |
| 1.3.10 细胞免疫荧光 | 第36-37页 |
| 1.3.11 PLGA和PLLA材料降解 | 第37页 |
| 1.3.12 CCK8检测细胞活性 | 第37页 |
| 1.3.13 乳酸浓度检测方法 | 第37-38页 |
| 1.4 实验结果 | 第38-53页 |
| 1.4.1 PLGA和PLLA材料降解液对OA软骨细胞的作用 | 第38-40页 |
| 1.4.2 乳酸对OA软骨细胞的作用 | 第40-45页 |
| 1.4.3 不同乳酸作用模式对人OA软骨细胞效果 | 第45-47页 |
| 1.4.4 乳酸对人OA软骨细胞作用机制的芯片筛查 | 第47-50页 |
| 1.4.5 乳酸对人OA软骨细胞作用机制的验证 | 第50-53页 |
| 1.5 讨论 | 第53-56页 |
| 2 第二章 乳酸对正常软骨细胞的作用及其机制 | 第56-72页 |
| 2.1 引言 | 第56-57页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第57-59页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第57-58页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第58页 |
| 2.2.3 相关试剂的配制 | 第58-59页 |
| 2.3 实验方法 | 第59-63页 |
| 研究路线 | 第59-61页 |
| 技术方法 | 第61-63页 |
| 2.3.1 人软骨细胞的分离和培养 | 第61页 |
| 2.3.2 细胞冻存 | 第61页 |
| 2.3.3 细胞复苏 | 第61-62页 |
| 2.3.4 总RNA提取 | 第62页 |
| 2.3.5 逆转录合成cDNA | 第62页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR(Real time PCR) | 第62-63页 |
| 2.4 实验结果 | 第63-69页 |
| 2.4.1 人软骨细胞传代过程中的表型变化 | 第63-64页 |
| 2.4.2 乳酸对人软骨细胞表型的作用 | 第64-65页 |
| 2.4.3 乳酸对人软骨细胞糖酵解的调控作用 | 第65-66页 |
| 2.4.4 软骨细胞表型与糖酵解的相关性 | 第66-68页 |
| 2.4.5 阻断糖酵解后乳酸对软骨细胞表型的作用 | 第68-69页 |
| 2.5 讨论 | 第69-72页 |
| 3 第三章 乳酸对人间充质干细胞的作用及其机制 | 第72-95页 |
| 3.1 引言 | 第72-73页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第73-76页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第73-74页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第74页 |
| 3.2.3 相关试剂的配制 | 第74-76页 |
| 3.3 实验方法 | 第76-86页 |
| 研究路线 | 第76-79页 |
| 技术方法 | 第79-86页 |
| 3.3.1 hMSC细胞分离培养 | 第79页 |
| 3.3.2 细胞冻存 | 第79页 |
| 3.3.3 细胞复苏 | 第79页 |
| 3.3.4 流式细胞术鉴定hMSC表面marker | 第79-80页 |
| 3.3.5 克隆形成能力及鉴定 | 第80页 |
| 3.3.6 三系分化及鉴定 | 第80页 |
| 3.3.7 Alkaline Phosphatase(ALP)染色 | 第80-81页 |
| 3.3.8 ALP活性检测 | 第81页 |
| 3.3.9 油红-O染色 | 第81页 |
| 3.3.10 SO染色 | 第81页 |
| 3.3.11 结晶紫染色 | 第81页 |
| 3.3.12 总RNA提取 | 第81-82页 |
| 3.3.13 逆转录合成cDNA | 第82页 |
| 3.3.14 实时荧光定量PCR(Real time PCR) | 第82-83页 |
| 3.3.15 siRNA的设计合成及转染步骤 | 第83-84页 |
| 3.3.16 细胞蛋白样品准备 | 第84-85页 |
| 3.3.17 Western-Blot | 第85-86页 |
| 3.4 实验结果 | 第86-92页 |
| 3.4.1 hMSC的分离和鉴定 | 第86页 |
| 3.4.2 乳酸对hMSC增殖和自我更新能力的作用 | 第86-88页 |
| 3.4.3 糖酵解在乳酸诱导的hMSC自我更新能力调控中的作用 | 第88-90页 |
| 3.4.4 KDM6B在乳酸诱导的hMSC的自我更新能力调控中的作用 | 第90-92页 |
| 3.5 讨论 | 第92-95页 |
| 总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 综述 | 第114-135页 |
| 参考文献 | 第125-135页 |
| 作者简历 | 第135-136页 |
