| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略表 | 第13-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-42页 |
| 1.1 诱导多能干细胞技术及其在疾病研究中的进展 | 第18-25页 |
| 1.1.1 iPSCs构建技术及其革新 | 第18-20页 |
| 1.1.2 iPSCs研究疾病的进展 | 第20-23页 |
| 1.1.3 针对iPS细胞进行基因编辑的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2 iPSCs在内耳研究中的进展 | 第25-27页 |
| 1.2.1 利用iPS细胞向内耳神经细胞分化的研究 | 第26页 |
| 1.2.2 利用iPS细胞向内耳毛细胞分化的研究 | 第26-27页 |
| 1.3 内耳毛细胞的生理特性 | 第27-28页 |
| 1.4 几种非传统肌球蛋白在内耳毛细胞中的作用 | 第28-33页 |
| 1.4.1 MYO7A | 第28-31页 |
| 1.4.2 MYO6 | 第31-32页 |
| 1.4.3 MYO15A | 第32-33页 |
| 1.5 总结与展望 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-42页 |
| 第二章 MYO7A杂合双突变的耳聋患者诱导多能干细胞株建立及鉴定的研究 | 第42-68页 |
| 2.1 实验材料、仪器与试剂 | 第42-46页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第43页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.4 抗体 | 第44-45页 |
| 2.1.5 常用试剂配制 | 第45-46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-56页 |
| 2.2.1 尿液的收集 | 第46页 |
| 2.2.2 尿液细胞系的建立、培养及传代 | 第46-47页 |
| 2.2.3 饲养层(MEF)细胞的制备 | 第47-48页 |
| 2.2.4 由尿液细胞诱导为多能性干细胞 | 第48-50页 |
| 2.2.5 iPS细胞的培养、传代、冻存及复苏 | 第50-51页 |
| 2.2.6 iPS细胞全能性鉴定 | 第51-56页 |
| 2.2.7 验证构建的iPS细胞来源的正确性 | 第56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-63页 |
| 2.3.1 临床调研 | 第56-57页 |
| 2.3.2 三种来源尿液细胞系的建立 | 第57-58页 |
| 2.3.3 三种来源的iPS细胞株的建立 | 第58页 |
| 2.3.4 三种来源的iPS细胞株全能性的鉴定 | 第58-63页 |
| 2.4 讨论 | 第63-65页 |
| 2.5 本章小节 | 第65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 第三章 MYO7A杂合双突变的耳聋患者特异iPSCs向内耳毛细胞诱导分化的研究 | 第68-101页 |
| 3.1 实验材料、仪器与试剂 | 第69-72页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第69页 |
| 3.1.2 常用仪器 | 第69-70页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第70-71页 |
| 3.1.4 抗体 | 第71页 |
| 3.1.5 常用试剂配置 | 第71-72页 |
| 3.1.6 统计学方法 | 第72页 |
| 3.2 实验方法 | 第72-78页 |
| 3.2.1 iPS细胞向内耳祖细胞方向分化 | 第72-73页 |
| 3.2.2 iPS细胞向内耳毛细胞方向分化 | 第73-74页 |
| 3.2.3 分化细胞的基因表达检测 | 第74-75页 |
| 3.2.4 免疫荧光检测 | 第75-76页 |
| 3.2.5 鬼笔环肽标记F-actin | 第76页 |
| 3.2.6 FM1-43FX染色 | 第76页 |
| 3.2.7 分化细胞的电镜样品处理 | 第76-77页 |
| 3.2.8 Western Blot检测 | 第77-78页 |
| 3.2.9 电生理检测 | 第78页 |
| 3.3 实验结果 | 第78-94页 |
| 3.3.1 正常人(C-iPS)、MY07A杂合双突变耳聋患者（P-iPS)及其父亲来源的iPS细胞(CF-iPS)向内耳祖细胞分化情况 | 第78-82页 |
| 3.3.2 C-、CP-及CF-iPS细胞向内耳毛细胞分化情况 | 第82-94页 |
| 3.4 讨论 | 第94-97页 |
| 3.5 本章小结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-101页 |
| 第四章 利用CRISPR技术对MYO7A杂合双突变的iPS细胞株基因修复的研究 | 第101-135页 |
| 4.1 实验材料、仪器与试剂 | 第102-105页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第102页 |
| 4.1.2 常用仪器 | 第102-103页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第103-105页 |
| 4.1.4 抗体(详见第三章) | 第105页 |
| 4.1.5 常用试剂配制 | 第105页 |
| 4.2 实验方法 | 第105-113页 |
| 4.2.1 maxGFP连入pX330 | 第105-107页 |
| 4.2.2 识别序列连入maxGFP-pX330 | 第107-108页 |
| 4.2.3 检测构建质粒的活性 | 第108-109页 |
| 4.2.4 设计ssODN | 第109页 |
| 4.2.5 对P-iPS细胞进行电转染 | 第109-110页 |
| 4.2.6 转染后细胞的流式分选及后续培养 | 第110页 |
| 4.2.7 单细胞克隆的测序确定 | 第110-111页 |
| 4.2.8 已被矫正细胞株(CP-iPS)的另一位点测序鉴定 | 第111页 |
| 4.2.9 已被矫正细胞株(CP-iPS)的酶切鉴定 | 第111-112页 |
| 4.2.10 脱靶检测 | 第112页 |
| 4.2.11 TA克隆 | 第112-113页 |
| 4.2.12 iPS细胞的全能性鉴定、向毛细胞诱导分化及检测 | 第113页 |
| 4.3 实验结果 | 第113-130页 |
| 4.3.1 将maxGFP链接pX330的实验 | 第113-115页 |
| 4.3.2 设计识别序列 | 第115-116页 |
| 4.3.3 测序确定连入打断质粒的识别序列的正确性 | 第116页 |
| 4.3.4 打靶质粒的活性验证 | 第116-118页 |
| 4.3.5 连接好的质粒与ssODN共转染P-iPS细胞 | 第118-119页 |
| 4.3.6 被纯合修复的阳性克隆的筛选与检测 | 第119-122页 |
| 4.3.7 对验证为基因修复正确的iPS细胞株(CP-iPS)进行全能性检测 | 第122-123页 |
| 4.3.8 将CP-iPS细胞向内耳毛细胞方向分化的实验 | 第123-130页 |
| 4.4 讨论 | 第130-133页 |
| 4.5 本章小结 | 第133页 |
| 参考文献 | 第133-135页 |
| 结论 | 第135-137页 |
| 附录 | 第137页 |
