| 英文缩略词表 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的制备及生物学活性研究 | 第17-31页 |
| 1 材料 | 第17-20页 |
| 1.1 菌株 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 1.4 试验动物 | 第18页 |
| 1.5 溶液配制 | 第18-20页 |
| 2 方法 | 第20-25页 |
| 2.1 重组表达菌株E.coli BL21(DE3)/pET-28a-rCPA-HSP65的制备 | 第20-23页 |
| 2.2 重组蛋白rCPA-HSP65的表达和纯化制备 | 第23-24页 |
| 2.3 动物免疫 | 第24页 |
| 2.4 中和抗体的效价测定 | 第24页 |
| 2.5 体内中和试验及攻毒保护试验 | 第24-25页 |
| 2.6 统计学分析 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-29页 |
| 3.1 扩增产物rCPA的电泳结果 | 第25页 |
| 3.2 重组表达质粒pET-28a-rCPA-HSP65的双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 3.3 重组蛋白rCPA-HSP65的表达鉴定 | 第26页 |
| 3.4 重组蛋白rCPA-HSP65表达条件的优化结果 | 第26-27页 |
| 3.5 重组蛋白rCPA-HSP65的纯化 | 第27-28页 |
| 3.6 重组蛋白rCPA-HSP65安全性及免疫检测结果 | 第28页 |
| 3.7 体内毒素中和试验 | 第28-29页 |
| 3.8 攻毒保护试验结果 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 第二章 抗A型产气荚膜梭菌α毒素全人源scFv的中试制备及生物学活性研究 | 第31-42页 |
| 1 试验材料 | 第31页 |
| 1.1 菌株 | 第31页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第31页 |
| 1.3 试验动物 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| 2.1 scFv菌株的复苏和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2 scFv的中试发酵及纯化 | 第32-33页 |
| 2.3 scFv的Western blot鉴定与免疫结合分析 | 第33页 |
| 2.4 scFv的结合动力学分析 | 第33页 |
| 2.5 scFv的体外中和活性检测 | 第33-34页 |
| 2.6 动物试验 | 第34-35页 |
| 2.7 统计学分析 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-41页 |
| 3.1 scFv菌株的双酶切及测序鉴定结果 | 第35页 |
| 3.2 scFv纯化产物的分析结果 | 第35-36页 |
| 3.3 scFv的Western blot分析结果 | 第36页 |
| 3.4 单链抗体的亲和力分析 | 第36-37页 |
| 3.5 scFv的体外活性检测结果 | 第37-38页 |
| 3.6 scFv的小鼠体内试验结果 | 第38-39页 |
| 3.7 病理组织学观察 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 抗A型产气荚膜梭菌α毒素全人源sc(Fv)2 的制备及其生物学活性研究 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第42页 |
| 1.2 试验动物 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第42-43页 |
| 2.2 重组质粒pET-28a-scFv的构建 | 第43页 |
| 2.3 重组质粒pET-28a-sc(Fv)2-5 的构建 | 第43-44页 |
| 2.4 重组质粒pET-28a-sc(Fv)2-15 的构建 | 第44页 |
| 2.5 双价单链抗体的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.6 双价单链抗体的包涵体纯化 | 第45页 |
| 2.7 双价单链抗体特异结合活性的检测 | 第45-46页 |
| 2.8 双价单链抗体体外中和活性检测 | 第46页 |
| 2.9 双价单链抗体的体内攻毒保护试验 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| 3.1 PCR扩增产物的核酸电泳分析结果 | 第46-47页 |
| 3.2 重组质粒pET-28a-sc(Fv)2-5 和pET-28a-sc(Fv)2-15 双酶切及测序鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 双价单链抗体的表达及鉴定结果 | 第48页 |
| 3.4 双价单链抗体的纯化结果 | 第48-49页 |
| 3.5 免疫结合活性检测结果 | 第49-50页 |
| 3.6 双价单链抗体的体外活性检测结果 | 第50页 |
| 3.7 动物攻毒保护试验 | 第50-51页 |
| 4.讨论 | 第51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 文献综述 | 第60-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 个人简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
