| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 谷氨酸棒杆菌及其应用 | 第8-9页 |
| 1.1.1 谷氨酸棒杆菌作为工业菌种的优势 | 第8页 |
| 1.1.2 谷氨酸棒杆菌的菌种选育及应用进展 | 第8-9页 |
| 1.2 寡核苷酸同源重组技术研究进展 | 第9-11页 |
| 1.2.1 基因编辑技术简介 | 第9-10页 |
| 1.2.2 寡核苷酸同源重组技术研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 谷氨酸棒杆菌同源重组效率优化的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3.1 谷氨酸棒杆菌电转化效率优化进展 | 第11-12页 |
| 1.3.2 寡核苷酸重组酶的优化进展 | 第12-13页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第13页 |
| 1.5 本研究的主要内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第15-16页 |
| 2.1.3 培养基及试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 菌种保藏与培养条件 | 第17-18页 |
| 2.2 分子生物学实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第18页 |
| 2.2.2 重组酶RecT的组成型表达 | 第18-20页 |
| 2.2.3 T7启动子介导的谷氨酸棒杆菌诱导系统的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.4 谷氨酸棒杆菌RecT蛋白整合表达系统的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 谷氨酸棒杆菌感受态的制备 | 第23页 |
| 2.2.6 谷氨酸棒杆菌的电转化 | 第23-24页 |
| 2.3 主要分析方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 平板抗性分析 | 第24页 |
| 2.3.2 蛋白质表达分析 | 第24页 |
| 2.3.3 单因素实验分析 | 第24页 |
| 2.3.4 响应面分析 | 第24-26页 |
| 2.3.5 电转化效率分析 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-46页 |
| 3.1 寡核苷酸电转化谷氨酸棒杆菌系统的效率优化 | 第27-34页 |
| 3.1.1 细胞培养基及培养条件的优化 | 第27页 |
| 3.1.2 细胞壁弱化剂和细胞膜流动性干扰剂的优化 | 第27-31页 |
| 3.1.3 感受态制备细胞生长OD值的优化 | 第31页 |
| 3.1.4 电转缓冲液的优化 | 第31-32页 |
| 3.1.5 电转化过程参数的优化 | 第32页 |
| 3.1.6 热激温度和热激时间的优化 | 第32-33页 |
| 3.1.7 质粒添加量及后培养时间的优化 | 第33-34页 |
| 3.1.8 优化后的电转效率验证 | 第34页 |
| 3.2 寡核苷酸及重组酶对重组效率的优化 | 第34-43页 |
| 3.2.1 寡核苷酸浓度的优化 | 第34-35页 |
| 3.2.2 寡核苷酸长度的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 寡核苷酸硫代磷酸碱基修饰的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.4 RecT重组酶基因的克隆及在谷氨酸棒杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| 3.2.5 T7启动子介导的谷氨酸棒杆菌诱导系统 13032-DE3/pJC1-T7-recT的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.6 13032-DE3 Zif’::T7-recT RecT蛋白整合表达系统的构建 | 第41-43页 |
| 3.3 寡核苷酸同源重组在谷氨酸棒杆菌中整合效率的评价 | 第43-46页 |
| 3.3.1 谷氨酸棒杆菌基因组上rpoB基因突变效率的评价 | 第44页 |
| 3.3.2 谷氨酸棒杆菌基因组上gyrA基因突变效率的评价 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-47页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
