| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 病毒性腹泻病原概况 | 第15-17页 |
| 1.1.1 流行性腹泻病毒 | 第15-16页 |
| 1.1.2 传染性胃肠炎病毒 | 第16页 |
| 1.1.3 猪轮状病毒 | 第16-17页 |
| 1.1.4 猪圆环病毒 | 第17页 |
| 1.2 猪腹泻病毒检测方法研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 病毒的电镜检测 | 第17-18页 |
| 1.2.2 病毒分离培养 | 第18-22页 |
| 1.3 实验目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.4 实验流程 | 第23-24页 |
| 第二章 多重普通PCR检测5种猪腹泻病毒方法的建立 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 病毒和样品 | 第24页 |
| 2.1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.4 模板 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25页 |
| 2.2.2 猪腹泻病毒单重PCR引物有效性和特异性 | 第25-26页 |
| 2.2.3 普通单重PCR条件优化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 单重普通PCR方法特异性、灵敏度、重复性实验 | 第27页 |
| 2.2.5 多重普通PCR体系引物有效性和特异性 | 第27页 |
| 2.2.6 多重普通PCR条件优化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 多重普通PCR方法灵敏度实验 | 第28页 |
| 2.2.8 临床样品检测 | 第28-29页 |
| 2.2.9 阳性样品测序验证 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-38页 |
| 2.3.1 单重普通PCR反应体系中引物有效性和特异性 | 第29-30页 |
| 2.3.2 单重普通PCR条件优化 | 第30-32页 |
| 2.3.3 单重普通PCR引物灵敏度 | 第32-33页 |
| 2.3.4 多重普通PCR反应体系中引物特异性 | 第33-34页 |
| 2.3.5 多重普通PCR体系优化 | 第34-35页 |
| 2.3.6 多重普通PCR灵敏度 | 第35-36页 |
| 2.3.7 5种猪腹泻病毒普通PCR样品检测 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 EVAGREEN多重实时荧光定量PCR检测五种猪腹泻相关病毒方法的建立和应用 | 第41-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 病毒 | 第41-42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第42-43页 |
| 3.2.2 单重荧光PCR引物有效性、特异性及产物Tm值 | 第43页 |
| 3.2.3 单重荧光定量PCR优化实验 | 第43页 |
| 3.2.4 单重荧光定量PCR灵敏度及重复性 | 第43-44页 |
| 3.2.5 多重实时荧光定量PCR引物有效性、特异性及产物Tm值 | 第44页 |
| 3.2.6 多重荧光定量PCR优化实验 | 第44页 |
| 3.2.7 多重荧光PCR灵敏度及重复性 | 第44-45页 |
| 3.3 五种猪腹泻病毒EVAGREEN多重实时荧光定量PCR方法检测临床样品 | 第45页 |
| 3.3.1 临床样品及样品核酸提取 | 第45页 |
| 3.3.2 临床样品检测 | 第45页 |
| 3.4 结果 | 第45-59页 |
| 3.4.1 单重实时荧光PCR特异性及扩增产物Tm值 | 第45-46页 |
| 3.4.2 单重荧光定量PCR体系优化 | 第46-47页 |
| 3.4.3 单重实时荧光PCR灵敏度及标准曲线 | 第47-49页 |
| 3.4.4 单重实时荧光PCR重复性 | 第49-51页 |
| 3.4.5 多重实时荧光PCR的扩增产物Tm值及特异性 | 第51页 |
| 3.4.6 多重实时荧光PCR检测单个病毒灵敏度及标准曲线 | 第51-53页 |
| 3.4.7 多重实时荧光PCR检测多个病毒灵敏度 | 第53页 |
| 3.4.8 多重实时荧光PCR重复性 | 第53-56页 |
| 3.4.9 不同病毒组合多重实时荧光PCR检测灵敏度 | 第56-57页 |
| 3.4.10 临床样品实时荧光PCR检测 | 第57-59页 |
| 3.5 讨论 | 第59-62页 |
| 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
