| 摘要 | 第11-17页 |
| Abstract | 第17-23页 |
| 符号和缩略词说明 | 第24-26页 |
| 第一章 前言 | 第26-37页 |
| 1.1 骨关节炎 | 第26-28页 |
| 1.2 转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β 1 | 第28-31页 |
| 1.3 二磷酸腺苷核糖多聚酶-1 (poly(ADP-ribose) polymerase-1,PARP-1) | 第31-34页 |
| 1.4 PARP-1与TGF-β1/Smad信号通路 | 第34-36页 |
| 1.5 结论与意义 | 第36-37页 |
| 第二章 实验仪器和实验试剂 | 第37-44页 |
| 2.1 实验仪器 | 第37页 |
| 2.2 实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.3 实验试剂的配制 | 第38-44页 |
| 第三章 实验材料和方法 | 第44-62页 |
| 3.1 载体的构建 | 第44-50页 |
| 3.1.1 PCR反应 | 第44-45页 |
| 3.1.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| 3.1.3 酶切及连接 | 第45-47页 |
| 3.1.4 质粒转化及小提 | 第47-48页 |
| 3.1.5 实验所用质粒图谱 | 第48-50页 |
| 3.2 小鼠原代膝关节软骨细胞提取和培养 | 第50-51页 |
| 3.2.1 细胞提取 | 第50页 |
| 3.2.2 细胞传代 | 第50页 |
| 3.2.3 细胞冻存 | 第50-51页 |
| 3.2.4 细胞转染 | 第51页 |
| 3.3 RNA的提取 | 第51-52页 |
| 3.4 反转录 | 第52-53页 |
| 3.5 实时定量PCR | 第53-54页 |
| 3.6 免疫印迹实验 | 第54-56页 |
| 3.6.1 细胞裂解 | 第54页 |
| 3.6.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第54-55页 |
| 3.6.3 转膜 | 第55页 |
| 3.6.4 成像 | 第55-56页 |
| 3.7 免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第56页 |
| 3.8 小鼠膝骨关节炎模型的建立 | 第56-57页 |
| 3.9 小鼠膝关节取材 | 第57-59页 |
| 3.9.1 取材步骤 | 第57-58页 |
| 3.9.2 小鼠膝关节脱钙处理 | 第58页 |
| 3.9.3 小鼠膝关节标本清洗 | 第58页 |
| 3.9.4 小鼠膝关节标本脱水和透明 | 第58页 |
| 3.9.5 小鼠膝关节标本浸蜡和包埋 | 第58-59页 |
| 3.9.6 小鼠膝关节标本切片 | 第59页 |
| 3.10 小鼠膝关节标本石蜡切片蕃红固绿染色 | 第59页 |
| 3.10.1 石蜡切片脱蜡和复水 | 第59页 |
| 3.10.2 石蜡切片蕃红固绿染色 | 第59页 |
| 3.11 小鼠膝关节标本石蜡切片免疫组织化学染色 | 第59-60页 |
| 3.11.1 石蜡切片脱蜡和复水 | 第60页 |
| 3.11.2 免疫组织化学染色 | 第60页 |
| 3.12 小鼠膝关节软骨损伤组织学评估 | 第60-61页 |
| 3.13 数据统计检验 | 第61-62页 |
| 第四章 实验结果 | 第62-80页 |
| 4.1 原发性膝骨关节炎中PARP-1水平升高 | 第62-68页 |
| 4.1.1 小鼠原发性膝骨关节炎的程度随着鼠龄的增长而加重 | 第62-64页 |
| 4.1.2 PARP-1与原发性膝骨关节炎的病变程度正相关 | 第64-67页 |
| 4.1.3 创伤性膝骨关节炎中PAPR-1表达不变 | 第67-68页 |
| 4.2 原发性膝骨关节炎中TGF-β 1/Smad信号通路的表达情况 | 第68-71页 |
| 4.2.1 原发性膝骨关节炎中Smad2/3的活性降低 | 第68-70页 |
| 4.2.2 原发性膝骨关节炎中Smad1/5/8的活性升高 | 第70-71页 |
| 4.3 PARP-1对TGF-β1/Smad信号通路的影响和分子机制 | 第71-74页 |
| 4.3.1 siRNA抑制软骨细胞中PARP-1的表达 | 第71-72页 |
| 4.3.2 PARP-1的下降导致TGF-β1/Smad信号通路的变化 | 第72-73页 |
| 4.3.3 PARP-1的下降导致Collagen Ⅱ和PAI-1的表达变化 | 第73-74页 |
| 4.3.4 PARP-1的下降导致Smad2/3复合体多聚化的抑制 | 第74页 |
| 4.4 PARP-1在小鼠体内对原发性膝骨关节炎的作用 | 第74-80页 |
| 4.4.1 PARP-1抑制剂对软骨细胞中PARP-1和MMP-13的表达影响 | 第75-76页 |
| 4.4.2 PARP-1抑制剂导致TGF-β 1/Smad信号通路的变化 | 第76-78页 |
| 4.4.3 PARP-1抑制剂对细胞外基质相关蛋白的表达水平的影响 | 第78页 |
| 4.4.4 PARP-1抑制剂缓解骨性关节炎病变程度 | 第78-80页 |
| 第五章 结果讨论 | 第80-83页 |
| 第六章 结论与展望 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 附表1: Real-time PCR引物列表 | 第84页 |
| 附表2: PARP-1 siRNA序列 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第92-93页 |
| 论文评阅及答辩情况表 | 第93-94页 |
| 已发表的外文论文 | 第94-112页 |
| 1 Gremlin-1 concentrations is correlated with the severity of knee osteoarthritis(已发表) | 第94-101页 |
| 2 Therapeutic Effect of Chinese Herb Duhuo on Knee Osteoarthritis in Rabbits(待发表) | 第101-112页 |
