| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论:YEATS domain的研究背景及基于片段的先导化合物筛选 | 第11-25页 |
| 1.1 核小体结构及表观遗传调控 | 第11页 |
| 1.2 组蛋白的翻译后修饰 | 第11-16页 |
| 1.2.1 组蛋白的甲基化修饰 | 第12-13页 |
| 1.2.2 组蛋白的酰化修饰及与修饰识别相关的蛋白质 | 第13-15页 |
| 1.2.2.1 组蛋白的酰化修饰 | 第13-14页 |
| 1.2.2.2 组蛋白酰化修饰的识别蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.3 组蛋白翻译后修饰与疾病的联系 | 第15-16页 |
| 1.3 YEATS domain可识别组蛋白酰化修饰 | 第16-21页 |
| 1.3.1 YEATS domain对于组蛋白酰化识别的类型和关键位点 | 第16-18页 |
| 1.3.2 人源YEATS家族蛋白质与疾病的联系 | 第18-21页 |
| 1.4 基于片段的先导化合物的发现 | 第21-25页 |
| 第2章 材料和方法 | 第25-45页 |
| 2.1 蛋白质相关信息的调研 | 第25页 |
| 2.2 目的基因的克隆 | 第25-34页 |
| 2.2.1 蛋白质的边界选择 | 第25-26页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.3 基因扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.4 核酸的琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.2.5 PCR产物回收 | 第28页 |
| 2.2.6 目的片段酶切及酶切产物回收 | 第28-29页 |
| 2.2.7 载体的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.8 连接DNA片段到质粒载体 | 第30页 |
| 2.2.9 连接产物的转化实验 | 第30-32页 |
| 2.2.10 鉴定及测序 | 第32页 |
| 2.2.11 定点突变 | 第32-34页 |
| 2.3 目的蛋白质的表达和纯化 | 第34-40页 |
| 2.3.1 目的蛋白质的小量试表达 | 第34页 |
| 2.3.2 目的蛋白质的表达 | 第34-35页 |
| 2.3.3 His-tag融合蛋白质Ni柱亲和纯化 | 第35-37页 |
| 2.3.4 GST-tag融合蛋白质亲和纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.5 分子筛纯化 | 第38-40页 |
| 2.4 基于片段的核磁共振筛选 | 第40-43页 |
| 2.4.1 初次筛选 | 第40-41页 |
| 2.4.2 二次筛选 | 第41-42页 |
| 2.4.3 HSQC滴定确认 | 第42-43页 |
| 2.5 ITC实验 | 第43页 |
| 2.6 蛋白质与小分子结合模式的模拟与预测 | 第43-44页 |
| 2.7 晶体生长及数据收集 | 第44-45页 |
| 2.7.1 晶体筛选 | 第44页 |
| 2.7.2 晶体数据的收集 | 第44-45页 |
| 第3章 AF9及ENL YEATS domain的片段筛选及鉴定 | 第45-56页 |
| 3.1 实验结果 | 第45-55页 |
| 3.1.1 AF9和ENL YEATS domain的克隆和表达 | 第45-47页 |
| 3.1.2 AF9 YEATS domain基于片段化的核磁共振筛选 | 第47-49页 |
| 3.1.3 化学位移微扰鉴定筛选结果及亲和力的测定 | 第49-52页 |
| 3.1.4 AF9 YEATS domain和小分子结合模式预测与分析 | 第52-53页 |
| 3.1.5 基于结构相似性的小分子亲和力比较 | 第53-55页 |
| 3.2 总结与讨论 | 第55-56页 |
| 第4章 PSPH抑制剂的研究 | 第56-63页 |
| 4.1 前言 | 第56-57页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 设计引物 | 第57页 |
| 4.2.2 基因克隆及蛋白质表达纯化 | 第57-58页 |
| 4.2.3 蛋白质结晶 | 第58页 |
| 4.2.4 核磁共振筛选及鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-62页 |
| 4.3.1 克隆表达和蛋白质纯化 | 第59页 |
| 4.3.2 核磁共振实验结果 | 第59-60页 |
| 4.3.2.1 HSQC谱图 | 第59-60页 |
| 4.3.2.2 筛选结果 | 第60页 |
| 4.3.3 晶体实验结果 | 第60-62页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第69页 |
